<b>Bijsluiter</b>. De hyperlink naar het originele document werkt niet meer. Daarom laat Woogle de tekst zien die in dat document stond. Deze tekst kan vreemde foutieve woorden of zinnen bevatten en de opmaak kan verdwenen of veranderd zijn. Dit komt door het zwartlakken van vertrouwelijke informatie of doordat de tekst niet digitaal beschikbaar was en dus ingescand en vervolgens via OCR weer ingelezen is. Voor het originele document, neem contact op met de Woo-contactpersoon van het bestuursorgaan.<br><br>====================================================================== Pagina 1 ======================================================================

<pre>Diacylglycerololie
Beoordeling van de veiligheid voor de consument, volgens de Europese
verordening 258/97 betreffende nieuwe voedingsmiddelen en nieuwe
voedselingrediënten
Diacylglycerol oil
Assessment of safety for the consumer, in accordance with European
Regulation 258/97 concerning novel foods and novel food ingredients
</pre>

====================================================================== Einde pagina 1 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 2 ======================================================================

<pre></pre>

====================================================================== Einde pagina 2 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 3 ======================================================================

<pre>Gezondheidsraad                             Vice-voorzitter
Health Council of the Netherlands
Aan de Minister van Volksgezondheid,
Welzijn en Sport
Onderwerp          : aanbieding advies ‘Diacylglycerololie’
Uw kenmerk         : GZB/VVB 2276337
Ons kenmerk        : 2002/07 VNV, U-1619/MR/cv/622-BX
Bijlagen           : 5 exemplaren
Datum              : 12 december 2002
Mijnheer de minister,
Hierbij bied ik u een advies aan in het kader van de door u mede namens de Minister van
Landbouw, Natuurbeheer en Visserij aan de Gezondheidsraad voorgelegde adviesaanvraag over de
veiligheid van nieuwe voedingsmiddelen en nieuwe voedselingrediënten. Het advies is een
zogenoemde eerste beoordeling, conform de Europese verordening 258/97, van
‘Diacylglycerololie’. Deze beoordeling is verricht door de Commissie ‘Veiligheidsbeoordeling
nieuwe voedingsmiddelen’ van de Gezondheidsraad. Ik heb dit advies heden ook aangeboden aan
de Minister van Landbouw, Natuurbeheer en Visserij.
Hoogachtend,
Prof. dr JGAJ Hautvast
Bezoekadres                                                          Postadres
Parnassusplein 5                                                     Postbus 16052
2511 VX Den Haag                                                     2500 BB Den Haag
Telefoon (070) 340 7520                                              Telefax (070) 340 75 23
E-mail: gr@gr.nl                                                     www.gr.nl
</pre>

====================================================================== Einde pagina 3 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 4 ======================================================================

<pre></pre>

====================================================================== Einde pagina 4 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 5 ======================================================================

<pre>Diacylglycerololie
Beoordeling van de veiligheid voor de consument, volgens de Europese
verordening 258/97 betreffende nieuwe voedingsmiddelen en nieuwe
voedselingrediënten
Gezondheidsraad:
Commissie Veiligheidsbeoordeling nieuwe voedingsmiddelen (VNV)
aan
de Minister van Volksgezondheid, Welzijn en Sport
de Minister van Landbouw, Natuurbeheer en Visserij
Nr 2002/07VNV, Den Haag, 12 december 2002
</pre>

====================================================================== Einde pagina 5 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 6 ======================================================================

<pre>De Gezondheidsraad, ingesteld in 1902, is een adviesorgaan met als taak de regering en
het parlement “voor te lichten over de stand der wetenschap ten aanzien van
vraagstukken op het gebied van de volksgezondheid” (art. 21 Gezondheidswet).
    De Gezondheidsraad ontvangt de meeste adviesaanvragen van de bewindslieden
van Volksgezondheid, Welzijn & Sport; Volkshuisvesting, Ruimtelijke Ordening &
Milieubeheer; Sociale Zaken & Werkgelegenheid en Landbouw, Natuurbeheer &
Visserij. De Raad kan ook eigener beweging adviezen uitbrengen. Het gaat dan als regel
om het signaleren van ontwikkelingen of trends die van belang kunnen zijn voor het
overheidsbeleid.
    De adviezen van de Gezondheidsraad zijn openbaar en worden in bijna alle gevallen
opgesteld door multidisciplinair samengestelde commissies van -op persoonlijke titel
benoemde- Nederlandse en soms buitenlandse deskundigen.
Deze publicatie kan als volgt worden aangehaald:
Gezondheidsraad: Commissie Veiligheidsbeoordeling nieuwe voedingsmiddelen.
Diacylglycerololie. Den Haag: Gezondheidsraad, 2002; publicatie nr. 2002/07VNV.
auteursrecht voorbehouden
Een openbare versie van dit advies is in te zien via de website van de
Gezondheidsraad: www.gr.nl.
</pre>

====================================================================== Einde pagina 6 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 7 ======================================================================

<pre>    Inhoud
    Samenvatting en conclusies 9
1   Inleiding 13
2   Volledigheid en juistheid van het dossier 15
2.1 Administratieve gegevens 15
2.2 Algemene beschrijving van het voedingsmiddel 15
2.3 Classificatie van het voedingsmiddel voor beoordeling 16
2.4 Informatievergaring over het voedingsmiddel 16
2.5 Beknopt overzicht door de aanvrager 17
2.6 Overige beoordelingen 17
2.7 Etiketteringsvoorstel van de aanvrager 17
3   Interpretatie en evaluatie van de voorgelegde gegevens 19
3.1 I Specificatie van het nieuwe voedingsmiddel (NV) 19
3.2 II Effecten van het gevolgde productieprocédé op het NV 20
3.3 III Achtergrondinformatie over het als bron voor het NV gebruikte organisme 22
3.4 IX Verwachte opname en gebruiksfrequentie van het NV 22
3.5 X Informatie op basis van eerdere blootstelling van de mens aan het NV of zijn bron 25
3.6 XI Informatie over de voedingswaarde van het NV 28
3.7 XII Microbiologische informatie over het NV 30
3.8 XIII Toxicologische informatie over het NV 30
    Inhoud                                                                                 7
</pre>

====================================================================== Einde pagina 7 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 8 ======================================================================

<pre>  Literatuur 35
  Bijlagen 37
A De adviesaanvraag 39
B De commissie 41
C EU-procedure 43
D Samenvatting van het dossier 45
  Engelse vertaling 51
8 Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 8 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 9 ======================================================================

<pre>Samenvatting en conclusies
De aanvrager Archer Daniels Midland Company (ADM) heeft een veiligheidsdossier
samengesteld over ENOVA-olie. Deze nieuwe plantaardige olie bevat voornamelijk
diacylglycerolen waardoor ze verschilt van traditionele oliën die uit triacylglycerolen
bestaan. ENOVA-olie wordt gemaakt met behulp van een specifiek lipase-enzym van
glycerol en vetzuren. Deze vetzuren zijn afkomstig van gangbare spijsoliën. Het dossier
dat de aanvrager heeft voorgelegd aan de commissie Veiligheidsbeoordeling Nieuwe
Voedingsmiddelen bevat voldoende (bio)chemische, voedingskundige en toxicologische
informatie om de veiligheid van de olie te kunnen beoordelen.
    De firma ADM vraagt toestemming om de ENOVA-olie als voedselingrediënt op de
Europese markt te brengen. De nieuwe olie kan gebruikt worden als vervanging van de
gebruikelijke vetten en oliën in verschillende soorten levensmiddelen. De categorieën
die de aanvrager voorstelt zijn: smeerbare vetten, saladedressings, bakkerijproducten,
yoghurt, gezondheidsrepen en gezondheidsdranken. Een andere toepassing die de
aanvrager voorstelt is het gebruik thuis van ENOVA-olie als gewone spijsolie.
    De commissie concludeert ten eerste dat de gegevens over de beoogde inneming
beperkt onderbouwd zijn. De aanvrager verstrekt gegevens over de inneming van
ENOVA-olie door zowel de Nederlandse als ‘de Europese’ consument. Dit betreft in
beide gevallen alléén gemiddelde waarden. De commissie vindt een gemiddelde van de
Europese inneming niet bruikbaar, gezien de verschillen in eetgewoontes tussen de
landen. Aan de hand van de gegevens in het dossier heeft de commissie zelf een
inschatting gemaakt van de totale dagelijkse inneming door de Nederlandse consument,
Samenvatting en conclusies                                                              9
</pre>

====================================================================== Einde pagina 9 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 10 ======================================================================

<pre>   gebaseerd op de meest waarschijnlijke combinatie van de verschillende ENOVA-olie-
   houdende levensmiddelen. Dit zou neerkomen op ongeveer 28 gram per dag.
        Diacylglycerolen zijn van nature aanwezig in dierlijke en plantaardige vetten. Ook
   het menselijk lichaam zelf produceert diacylglycerolen als omzettingsproduct van
   triacylglycerolen. Daarnaast worden deze verbindingen als emulgator al decennia lang
   toegevoegd aan allerlei levensmiddelen. De commissie stelt vast dat de dagelijks
   inneming van ENOVA-olie die de aanvrager voorstelt van dezelfde orde van grootte is
   als de gezamenlijke inneming van diacylglycerolen via natuurlijke vetten en
   toegevoegde emulgatoren. Ook zijn er de commissie vanuit de wetenschappelijke
   biomedische literatuur geen meldingen bekend dat diacylglycerolenconsumptie wordt
   geassocieerd met gezondheidsklachten.
        De beschrijving van de vertering en het metabolisme van diacylglycerolen is in het
   dossier voldoende onderbouwd met wetenschappelijke gegevens van recente
   onderzoeken bij hoofdzakelijk ratten, maar ook bij mensen. De voorziening van
   essentiële vetzuren lijkt gewaarborgd, omdat de olie naast linolzuur ook α-linoleenzuur
   bevat. De commissie stemt in met de conclusie van de aanvrager dat de ENOVA-olie
   voedingskundig gezien gelijkwaardig is aan traditionele triacylglycerololiën. Ook vindt
   de commissie dat de aanvrager voldoende heeft aangetoond dat de consumptie van
   diacylglycerololie niet leidt tot gezondheidsklachten of andere nadelige effecten. Zij
   baseert dit op resultaten van mensgebonden onderzoeken die in het dossier zijn
   opgenomen. De commissie stelt vast dat bij gezonde vrijwilligers met een normaal
   lichaamsgewicht geen klinisch relevante, significante verschillen zijn gevonden na
   langdurige consumptie van ENOVA-olie in vergelijking met traditionele
   triacylglycerololie.
        De commissie stelt het niveau van veilige blootstelling aan ENOVA-olie vast op
   maximaal 140 gram per 70 kilogram lichaamsgewicht per dag. Het dossier bevat
   voldoende toxicologische informatie over de ENOVA-olie om tot deze vaststelling te
   komen. De resultaten van een mutageniciteitstest in vitro zijn negatief. Er zijn geen
   nadelige effecten vastgesteld bij ratten die gedurende 1,5 jaar dagelijks voer aten dat
   2,65 of 5,3% van de nieuwe olie bevatte. De commissie heeft de hoogste blootstelling in
   dit onderzoek berekend als het gemiddelde van mannelijke en vrouwelijke ratten, wat
   uitkomt op ongeveer 2 gram diacylglycerololie per kilogram lichaamsgewicht per dag.
   De commissie beschouwt dit als de NOAEL (no observed adverse effect level), omdat
   hierbij geen teststof gerelateerde effecten zijn waargenomen.
   Op basis van het totaal aan gegevens concludeert de commissie dat de nieuwe olie veilig
   is voor menselijke consumptie. Hieronder volgt een samenvatting van de argumenten.
   • Blootstelling aan diacylglycerolen is niet nieuw. De gemiddelde consument krijgt
        met de gewone voeding reeds een significante hoeveelheid diacylglycerolen binnen.
10 Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 10 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 11 ======================================================================

<pre>   Bij de voorgestelde toepassing van ENOVA-olie zou de consumptie van
   diacylglycerolen zo’n twee tot vijf maal toenemen. Daarnaast is het zo dat de
   vetzuren, de belangrijkste componenten na hydrolyse van ENOVA-olie in het
   maagdarmkanaal, dezelfde zijn als die in gangbare spijsoliën.
•  Onderzoek met vrijwilligers heeft aangetoond dat langdurige dagelijkse inneming
   van zo’n 40 gram diacylglycerololie geen andere effecten op de gezondheid heeft
   dan vergelijkbare inneming van traditionele triacylglycerololiën.
•  De veilige bovengrens voor mensen is vastgesteld op 140 gram diacylglycerololie
   per 70 kilogram lichaamsgewicht per dag (2 g/kg/dag), gebaseerd op de resultaten
   van chronisch proefdieronderzoek.
•  De commissie heeft de Nederlandse innemingsgegevens van totaal vet gebruikt om
   de hoogst mogelijke consumptie van ENOVA-olie af te leiden. Uit
   voedselconsumptiegegevens van TNO-Voeding blijkt dat de 90 percentiel van de
   totale vetinneming bij de bevolkingsgroep die de meeste energie verbruikt, namelijk
   mannen in de leeftijd van 19 tot 22 jaar, 161 gram is. Het is echter niet reëel te
   veronderstellen dat al het vet in ons voedsel door diacylglycerolen vervangen zou
   kunnen worden. De commissie acht het daarom niet waarschijnlijk dat de veilige
   bovengrens van inneming zal worden overschreden.
Samenvatting en conclusies                                                             11
</pre>

====================================================================== Einde pagina 11 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 12 ======================================================================

<pre>12 Diacylglycerololie</pre>

====================================================================== Einde pagina 12 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 13 ======================================================================

<pre>Hoofdstuk 1
          Inleiding
          Op 17 april 2002 vroeg de minister van VWS het oordeel van de commissie
          Veiligheidsbeoordeling nieuwe voedingsmiddelen (VNV), hierna te noemen ‘de
          commissie‘, over de veiligheid voor de consument van een diacylglycerololie genaamd
          ‘ENOVA-olie’. De vetzuren in deze nieuwe olie zijn afkomstig van gangbare spijsoliën
          maar de chemische structuur van de vetbestanddelen is anders dan die in traditionele
          oliën. De firma ADM heeft daarom toestemming voor marktintroductie gevraagd,
          volgens Verordening 258/97 van het Europese Parlement en de Raad inzake nieuwe
          voedingsmiddelen (bijlage C). Een van de redenen om de nieuwe olie op de markt te
          brengen is de veronderstelde gezondheidsbevorderende werking. De aanvrager noemt in
          dit verband hart- en vaatziekten, atherosclerose, overgewicht en diabetes. De commissie
          VNV merkt met nadruk op dat evaluatie van de veronderstelde
          gezondheidsbevorderende werking geen onderdeel is van deze veiligheidsbeoordeling.
               De beoordelingsprocedure van de ENOVA-olie is als volgt verlopen. In juli 2002
          besprak de commissie voor het eerst het dossier dat was opgesteld door de aanvrager,
          die hierin de veiligheid van het nieuwe product heeft geëvalueerd (ADM02). De
          commissie heeft op 25 juli 2002 de firma enkele vragen gesteld waarvan de
          belangrijkste betrekking hadden op a) het enzym dat in het productieproces wordt
          gebruikt, en b) de specificatie van de producten die in het proefdier- en mensgebonden
          onderzoek waren toegediend. Op 30 augustus 2002 heeft de aanvrager aanvullende
          informatie verstrekt (ADM02a). Na herhaald overleg met de aanvrager over een aantal
          onderdelen van het antwoord, heeft de commissie de beoordeling afgerond in haar
          bijeenkomst van november 2002. Dit advies is een weergave van haar bevindingen.
          Inleiding                                                                               13
</pre>

====================================================================== Einde pagina 13 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 14 ======================================================================

<pre>14 Diacylglycerololie</pre>

====================================================================== Einde pagina 14 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 15 ======================================================================

<pre>Hoofdstuk 2
          Volledigheid en juistheid van het dossier
2.1       Administratieve gegevens
          De naam en het adres van de aanvrager zijn: ADM Kao LLC, 4666 Faries Parkway,
          Decatur, IL, 62526, USA. ADM (Archer Daniels Midland Company) is onderdeel van
          het samenwerkingsverband ADM Kao LLC, die de ENOVA olie produceert in de
          Verenigde Staten.
2.2       Algemene beschrijving van het voedingsmiddel
          De ENOVA-olie wordt met behulp van enzymtechnologie gemaakt van gangbare
          spijsoliën en bestaat grotendeels uit diacylglycerolen (synoniem met diglyceriden).
          Hierin verschilt de nieuwe olie van traditionele plantaardige oliën, die voornamelijk uit
          triacylglycerolen (synoniem met triglyceriden) bestaan. De belangrijkste vetzuren in
          ENOVA-olie zijn oliezuur en linolzuur. Behalve dat de aanvrager het nieuwe product als
          gewone spijsolie op de markt wil brengen, is het ook zijn bedoeling dat
          levensmiddelenfabrikanten het zullen verwerken in verschillende eindproducten. De
          categorieën die de aanvrager daarvoor voorstelt zijn: smeerbare vetten en margarines,
          saladedressings (inclusief mayonaise), bakkerijproducten, yoghurt, gezondheidsrepen
          en gezondheidsdranken (zie Bijlage D).
          Volledigheid en juistheid van het dossier                                                 15
</pre>

====================================================================== Einde pagina 15 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 16 ======================================================================

<pre>2.3 Classificatie van het voedingsmiddel voor beoordeling
    De aanvrager doet een classificatievoorstel als onderdeel van thema III”
    “Achtergrondinformatie over de bron”. Het nieuwe product zou horen in klasse 1,
    subklasse 1.1, zoals beschreven in deel I van Aanbeveling 97/618 van de Europese
    Commissie (EG97a). Dit betekent dat het een eenvoudig mengsel is van chemische
    stoffen, afkomstig van niet-genetisch gemodificeerde bronnen, en dat deze bronnen
    binnen de Europese Gemeenschap al eerder voor de voeding gebruikt zijn.
        De commissie is het eens met de aanvrager dat de nieuwe olie valt onder categorie e
    ‘voedingsmiddelen geïsoleerd uit planten’ van de nieuwe voedingsmiddelen
    verordening (EG97). De commissie is het niet eens met de indeling in subklasse 1.1. De
    aanvrager vermeldt namelijk dat uitgangsmateriaal van genetisch gemodificeerde
    bronnen niet wordt uitgesloten, gezien het aanbod van zaadoliën op de wereldmarkt. De
    commissie concludeert daarom dat de huidige indeling in klassen (EG97a) niet
    bruikbaar is voor het nieuwe product in kwestie, en verwijst voor meer informatie naar
    paragraaf 3.3.
2.4 Informatievergaring over het voedingsmiddel
    De aanvrager heeft de informatie, die essentieel is voor de beoordeling van de
    geschiktheid voor de consumptie van het voedingsmiddel, gestructureerd volgens de
    thema’s die zijn voorgeschreven in Aanbeveling 97/618 van de Europese Commissie
    (EG97a).
    I    Specificatie van het nieuwe voedingsmiddel (NV)
    II   Effecten van het gevolgde productieprocédé op het NV
    III Achtergrondinformatie over het als bron voor het NV gebruikte organisme
    IX Verwachte opname en gebruiksfrequentie van het NV
    X    Informatie op basis van eerdere blootstelling van de mens aan het NV of zijn bron
    XI Informatie over de voedingswaarde van het NV
    XII Microbiologische informatie over het NV
16  Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 16 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 17 ======================================================================

<pre>    XIIIToxicologische informatie over het NV
    De aanvrager bespreekt op overzichtelijke wijze elk van deze thema’s, en verwijst voor
    de gebruikte gegevens naar bijlagen of wetenschappelijke artikelen. Het dossier bevat
    voldoende (bio)chemische, voedingskundige en toxicologische informatie om de
    veiligheid van het NV te kunnen beoordelen. Tevens heeft de commissie
    wetenschappelijke biomedische literatuur geraadpleegd.
2.5 Beknopt overzicht door de aanvrager
    Het dossier bevat een beknopt overzicht dat aan de lidstaten is toegestuurd, conform
    artikel 6, lid 2 van de Europese Verordening (EG) 258/97 (EG97).
2.6 Overige beoordelingen
    De Japanse overheid heeft in mei 1998 toestemming gegeven aan Kao Corporation om
    het nieuwe voedingsmiddel diacylglycerololie te verhandelen op de Japanse markt. De
    commerciële productnaam is ‘Econa® oil’. Naast het gebruik als spijsolie wordt het
    verwerkt in margarine, saladedressing, tonijn in blik, enkele bakkerijproducten en kant-
    en-klare sauzen of kruidenmengsels voor curry.
         De diacylglycerol olie van Kao Corporation is in december 2000 door de Food and
    Drug Administration in de Verenigde Staten (US FDA) erkent als veilig (generally
    recognized as safe (GRAS)). Het rapport van de Amerikaanse deskundigen, die de
    veiligheid van deze olie beoordeeld hebben, is als bijlage 15 in het onderhavige dossier
    meegeleverd. Dit betreft het door de aanvrager voorgestelde gebruik als spijsolie en als
    ingrediënt van margarineachtige producten. De gemeenschappelijke onderneming van
    ADM en KAO Corporation gaat de olie in de Verenigde Staten verhandelen onder de
    naam ‘ENOVATM oil’.
2.7 Etiketteringsvoorstel van de aanvrager
    Etikettering dient in overeenstemming te zijn met Richtlijn 2000/13/EG (EG00) en
    artikel 8 van Verordening (EG) 258/97(EG97). Het etiketteringsvoorstel wordt in
    Nederland in het Regulier Overleg Warenwet besproken, en wordt dus niet beoordeeld
    in dit advies.
    Volledigheid en juistheid van het dossier                                                17
</pre>

====================================================================== Einde pagina 17 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 18 ======================================================================

<pre>18 Diacylglycerololie</pre>

====================================================================== Einde pagina 18 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 19 ======================================================================

<pre>Hoofdstuk 3
          Interpretatie en evaluatie van de
          voorgelegde gegevens
3.1       I Specificatie van het nieuwe voedingsmiddel (NV)
          ENOVA-olie bestaat grotendeels uit diacylglycerolen, met oliezuur en linolzuur als de
          belangrijkste vetzuren. De aanvrager specificeert zijn product als volgt:
          • diacylglycerol >80%
          • triacylglycerol <20%
          • monoacylglycerol <5%
          • onverzadigde vetzuren
              oliezuur 20-65%
              linolzuur 15-65%
              α-linoleenzuur <15%
          • verzadigde vetzuren (palmitinezuur en stearinezuur) <10%
          Het merendeel van de diacylglycerolen (70%), de zogeheten 1,3 diacylglycerolen, heeft
          geen vetzuur veresterd aan het middelste koolstofatoom van de glycerolketen. De
          overige 30% bestaat uit 1,2 (of 2,3) diacylglycerolen. Daarnaast bevat het product kleine
          hoeveelheden antioxidanten <0,2% (ascorbyl palmitaat, tocoferolmengsel) en vrije
          vetzuren (<0,2%). Het fytosterolgehalte is maximaal 1,2%.
              Het dossier bevat de fysische en chemische karakteristieken van de
          diacylglycerololie, maar geen beschrijving van de gebruikte methoden om de
          bestanddelen analyseren. De commissie gaat ervan uit dat hiervoor gevalideerde
          standaardtechnieken zijn gebruikt.
          Interpretatie en evaluatie van de voorgelegde gegevens                                    19
</pre>

====================================================================== Einde pagina 19 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 20 ======================================================================

<pre>         De commissie concludeert uit de verstrekte samenstellingsgegevens van vijf
    representatieve partijen dat er weinig variatie is over de productiejaren van 1998 tot
    2000 (ADM02). Het gemiddelde linolzuur- en oliezuurgehalte van de in deze periode
    geproduceerde olie is respectievelijk 60% en 28% van het totaal aan vetzuren. Ook blijkt
    uit de gegevens van meer recente producties van februari en maart 2002 dat de olie meer
    linolzuur (46%) dan oliezuur bevat (37%) (ADM02a). De fractie verzadigde vetzuren,
    voornamelijk palmitinezuur en stearinezuur, is vrij consistent en bedraagt ongeveer 4%
    van het totaal aan vetzuren. Uit deze recente samenstellingsgegevens blijkt dat het
    erucazuurgehalte 0,02% van het totaal aan vetzuren is (ADM02a). De commissie vindt
    dit voldoende laag voor de toepassing van ENOVA-olie als spijsolie.
         De commissie concludeert dat de productinformatie betrouwbaar weergeeft wat de
    samenstelling is van de te vermarkten ENOVA-olie en voldoende is om de veiligheid te
    kunnen beoordelen.
3.2 II Effecten van het gevolgde productieprocédé op het NV
    Voor de productie van de nieuwe olie worden glycerol en uit spijsolie verkregen
    vetzuren gebruikt. Alle basisproducten zijn van levensmiddelenkwaliteit. De
    diacylglycerolen worden gesynthetiseerd met behulp van een specifiek 1,3 lipase. Dit
    enzym verestert de vetzuren stereospecifiek aan glycerol, zodat het middelste
    koolstofatoom (C2) onbezet blijft. Daarbij wordt geen onderscheid gemaakt tussen het
    eerste en derde koolstofatoom. De aanvrager vermeldt dat een dergelijke enzymatische
    esterificatie al sinds 1993 in de Europese levensmiddelenindustrie wordt toegepast. Het
    ruwe product wordt gezuiverd door achtereenvolgens destillatie, ontkleuring en
    verwijdering van ongewenste geurstoffen, waarna antioxidanten worden toegevoegd.
         De aanvrager heeft in ENOVA-olie de afwezigheid aangetoond van een achttal
    zware metalen, waaronder lood, arseen en kwik. Hierbij werd een detectiegrens van 0,5
    mg per kg gehanteerd.
         Op verzoek van de commissie heeft de aanvrager uitgebreide informatie over het
    gebruikte enzym verstrekt (ADM02a). Die informatie is hieronder kort samengevat. Het
    enzym LipozymeIM wordt geïsoleerd uit de schimmel Aspergillus oryzae. Deze
    schimmel is hiervoor genetisch gemodificeerd door het gen dat in de schimmel
    Rhizomucor miehei codeert voor het lipase-enzym tot expressie te brengen. Omdat bij de
    productie van de diacylglycerolen het LipozymeIM vastzit aan een bepaalde drager (het
    is geïmmobiliseerd) bevat het eindproduct in principe geen lipase-enzym. Het gebruik
    van enzymen afkomstig van Aspergillus oryzae in de levensmiddelenindustrie dateert al
    van voor 1958. Er zijn geen ziekteverwekkende eigenschappen bekend van dit micro-
    organisme, dat door de US FDA als veilig wordt beschouwd. LipozymeIM is officieel
    goedgekeurd voor de bereiding van levensmiddelen door de Veterinary and Food
20  Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 20 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 21 ======================================================================

<pre>Administration in Denemarken en door het Canadese ministerie van Volksgezondheid
(Health Canada). De aanvrager refereert aan verschillende toxicologische onderzoeken
van het enzympreparaat dat door derden is uitgevoerd, in vitro en met ratten. Op basis
daarvan concludeert hij dat het betreffende lipase veilig kan worden toegepast.
     De informatie in het dossier geeft de commissie alleen een globaal inzicht in de
verschillende fasen van het productieproces. De gebruikte technieken zijn echter bekend
uit de spijsolie-industrie. De bewering dat de stabiliteit van ENOVA-olie vergelijkbaar
is met die van andere spijsoliën wordt door de aanvrager niet verder onderbouwd. De
commissie gaat er echter vanuit dat voor het nieuwe product de normale criteria voor
houdbaarheid en kwaliteit van eetbare oliën en vetten worden nageleefd. Om de
levensmiddelenkwaliteit van de nieuwe olie te waarborgen, wordt de firma geacht zich
te houden aan de Richtlijn 93/43/EEG inzake levensmiddelenhygiëne (EG93). Uit de
aanvullende informatie die de aanvrager heeft verstrekt over de vetzuursamenstelling
(ADM02a), blijkt dat ruim 4% van de ENOVA-olie uit transvetzuren bestaat. De
commissie stelt dat dit transvetzuurgehalte niet hoger is dan dat van allerlei commerciële
vetten in onze dagelijkse voeding. Het is de commissie bekend dat transvetzuren zo
goed als zeker een rol spelen bij het verhogen van de kans op hart- en vaatziekten. Zij
wijst op de aanbeveling van de Nederlandse Gezondheidsraad dat de hoeveelheid
transvetzuren in industrieel bewerkte eetbare plantaardige oliën en vetten tot een
minimum beperkt zou moeten worden (GR02). De Deense Veterinary and Food
Administration heeft er recent op aangedrongen de hoeveelheid transvetzuren terug te
brengen tot ten hoogste 1 g per 100 g olie.
     De commissie merkt op dat in Nederland en in de EU geen officiële toestemming
vereist is om enzymen als hulpstoffen bij de voedselbereiding te mogen gebruiken. In
sommige lidstaten bestaat er wel een vrijwillige procedure om de veiligheid voor de
consument te beoordelen. In Nederland vallen dergelijke hulpstoffen onder de algemene
bepalingen van de Warenwet.
     De commissie bevestigt dat het geïmmobiliseerde lipase, afkomstig van een
genetisch gemodificeerde schimmel Aspergillus oryzae, veilig bij de productie kan
worden gebruikt. De commissie beoordeelt de aanvullende informatie die de aanvrager
heeft verstrekt als betrouwbaar en voldoende. De set toxicologische testen voldoet aan
de eisen van het Wetenschappelijk Comité voor de Menselijke Voeding voor het toetsen
van enzymen op voedselveiligheid (SCF92), en ook aan de meer recente richtlijnen die
Pariza en Johnson hebben voorgesteld (Par01). De commissie merkt op dat de
Australische voedselautoriteit de toepassing van ditzelfde lipase twee jaar geleden
uitgebreid heeft geëvalueerd, waarna het onder de handelsnaam ‘palatase’ officieel is
toegelaten voor de bereiding van levensmiddelen (FSA00). De toxicologische gegevens
in het veiligheidsdossier van deze Australische aanvraag zijn dezelfde als die in het
onderhavige dossier (ADM02a, appendix F). Ten overvloede merkt de commissie op dat
Interpretatie en evaluatie van de voorgelegde gegevens                                     21
</pre>

====================================================================== Einde pagina 21 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 22 ======================================================================

<pre>    door de verschillende hittebehandelingen tijdens het productieproces er geen intacte
    enzymen of andere eiwitten meer in het eindproduct aanwezig zullen zijn.
         Samenvattend concludeert de commissie dat de aanvrager voldoende onderbouwt
    dat de diacylglycerololie geen verontreinigingen bevat die schadelijk zijn voor de
    volksgezondheid.
3.3 III Achtergrondinformatie over het als bron voor het NV gebruikte
    organisme
    De vetzuren die bij de productie van de nieuwe olie als uitgangsmateriaal worden
    gebruikt zijn hoofdzakelijk afkomstig van sojabonenolie (uit zaad van Glycine max) en
    raapzaadolie (uit zaad van Brassica campestris). Ook andere gangbare plantaardige
    oliën worden gebruikt. De zaadoliën zijn afkomstig van zowel traditionele als genetisch
    gemodificeerde plantaardige gewassen. Volgens de aanvrager zijn deze variëteiten door
    de overheid goedgekeurd voor menselijke consumptie in de Verenigde Staten, de EU en
    andere landen.
         De commissie bevestigt dat de traditionele plantaardige bronnen veilig zijn voor
    menselijke consumptie en wereldwijd worden toegepast in de olie- en vetindustrie. De
    commissie heeft geen bezwaar tegen het gebruik van olie afkomstig van genetisch
    gemodificeerde gewassen, mits deze oliën zijn goedgekeurd voor menselijke
    consumptie via een autorisatie of notificatieprocedure binnen de EU.
3.4 IX Verwachte opname en gebruiksfrequentie van het NV
    De aanvrager zal de ENOVA-olie op de markt brengen als een gewone spijsolie om
    thuis te gebruiken. De andere toepassing is als vervanging van de gebruikelijke vetten en
    oliën in producten uit diverse categorieën levensmiddelen. De aanvrager heeft de
    hoeveelheden van de nieuwe olie die de consument inneemt met de verschillende
    eindproducten vastgesteld aan de hand van onderstaande gegevensbestanden over
    voedselconsumpties. Hierbij heeft de aanvrager, voor zover mogelijk, de gegevens van
    de Nederlandse consument apart vermeld naast die van ‘de Europese consument’.
    1 Eurostat Data Shop (rapport 1998-99) geeft de gemiddelde waarden van acht
         Europese landen, gebaseerd op voedselbeschikbaarheidsonderzoek.
    2 Rapporten van TNO-Voeding over voedselconsumptiepeilingen onder de
         Nederlandse bevolking in 1997-1998.
    3 Rapport van het Institute European Food Studies (IEFS) inzake methodologische
         aspecten van voedselconsumptiepeilingen (gegevens zijn afkomstig van België,
         Duitsland, Finland, Ierland en Italië).
22  Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 22 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 23 ======================================================================

<pre>Voor de toepassing van ENOVA-olie in smeerbare vetten gaat de aanvrager uit van een
dagelijkse consumptie van 17 g ENOVA-olie. Dit is gebaseerd op een gemiddeld
'gebruik' van 27 g smeerbare vetten per dag (Eurostat) en ten hoogste 64% vloeibare olie
in dit type producten. Voor de Nederlanders zou de dagelijks consumptie van ENOVA-
olie iets lager uitkomen, te weten 14 g (TNO-rapport: 22 g smeerbare vetten per persoon
per dag).
     Het gehalte ENOVA-olie in saladedressings kan 80 à 90% bedragen. Een inneming
van 14 g dressing per persoon per dag (Eurostat, inclusief mayonaise) draagt dan 12 à 13
g bij aan de dagelijkse consumptie van de nieuwe olie. Volgens de gegevens van TNO
zou dit voor de Nederlanders hoogstens 2 g zijn.
     Bakkerijproducten bevatten normaliter ongeveer 1% olie. Indien dit wordt
vervangen door ENOVA-olie, dan zal de dagelijkse consumptie ruwweg 1 g zijn,
aangezien Europeanen dagelijks 125 g brood en biscuits eten (IEFS). Voor de
Nederlanders zijn er meer gedetailleerdere gegevens beschikbaar. Zij consumeren
dagelijks 173 g aan brood, biscuits, croissants, gebak, cake, crackers, koekjes (TNO-
rapport) zodat de dagelijkse ENOVA-olie inneming op ongeveer 2 g zou uitkomen.
     Europeanen (IEFS) en Nederlanders (TNO-rapport) consumeren gemiddeld per dag
respectievelijk 55 g en 78 g yoghurt. Hierin kan ongeveer 3% van de nieuwe olie
worden verwerkt. De inneming van ENOVA-olie bedraagt dan ongeveer 2 g
(respectievelijk 1,7 en 2,3 g).
     De aanvrager stelt dat gezondheidsrepen door voedingsbewuste personen worden
geconsumeerd. Dit zijn repen (inclusief graanrepen) met veel eiwitten en/of veel
energie, en/of verrijkt met vitamines en mineralen. Over consumptie in Europa zijn
echter geen gegevens beschikbaar. De aanvrager gaat uit van een dagelijkse inneming
van 50 g (vergeleken met 40-60 g in de Verenigde Staten). Als de gezondheidsreep 6%
ENOVA-olie bevat, dan zal zo’n reep ongeveer 3 g bijdragen aan de dagelijkse ENOVA-
olie consumptie.
     Onder gezondheidsdranken verstaat de aanvrager a) sportdrankjes, b) drankjes met
extra vitamines en mineralen, c) vloeibare en instant maaltijdvervangers, en andere
producten in poedervorm die moeten worden opgelost. Gegevens over consumptie
hiervan ontbreken in Europa. De aanvrager gaat uit van een dagelijkse inneming van
250-325 g. Het vetgehalte van een drankje om je gewicht op peil te houden is meestal 1
gewichtsprocent. Met andere woorden: één blikje drinken kan 3 g bijdragen aan de
dagelijkse inneming van ENOVA-olie.
     De aanvrager gaat uit van een maximaal veilig niveau van inneming van 2,35 g
ENOVA-olie per kg lichaamsgewicht (of wel 165 g olie per persoon van 70 kg per dag).
Dit is gebaseerd op de resultaten van een twee jaar durend onderzoek met ratten. De
consumptiegegevens van elke productcategorie worden met deze resultaten vergeleken.
De aanvrager constateert dat voor alle producten geldt dat de inneming van het
Interpretatie en evaluatie van de voorgelegde gegevens                                   23
</pre>

====================================================================== Einde pagina 23 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 24 ======================================================================

<pre>   ingrediënt ENOVA-olie onder deze bovengrens ligt. De aanvrager acht het niet
   waarschijnlijk dat mensen op één dag producten uit alle categorieën ENOVA-
   oliehoudende levensmiddelen zullen consumeren. Als dit toch gebeurt, dan zal de totale
   inneming van ENOVA-olie 51 g bedragen voor de gemiddelde Europeaan en 38 g voor
   de gemiddelde Nederlander (respectievelijk 0,7 en 0,5 g/kg). Omdat ook deze beide
   waarden onder de veilige bovengrens vallen die de aanvrager hanteert, concludeert hij
   dat het onwaarschijnlijk is dat onveilige innemingsniveaus bereikt zullen worden.
        Daarnaast bespreekt de aanvrager nog een andere, zogeheten holistische benadering.
   In 16 Europese landen is de gemiddelde dagelijkse consumptie van toegevoegde
   plantaardige oliën ongeveer 12 g per persoon bij een lichaamsgewicht van 70 kg. De
   Grieken hebben de hoogste inneming, te weten ongeveer 30 g per dag. De aanvrager
   gaat ervan uit dat dit reële schattingen zijn van de olie-inneming, omdat deze gegevens
   gebaseerd zijn op Europese olieproductiegegevens afkomstig van een onafhankelijk
   voedingsonderzoek-instituut in het Verenigd Koninkrijk (Leatherhead RA). Hierbij is
   ook de olie die wordt gebruikt voor de industriële bereiding van levensmiddelen
   automatisch meegerekend.
        De commissie heeft kennis genomen van de wijze waarop de beoogde inneming van
   de ENOVA-olie is afgeleid. Zij wijst erop dat consumptiegegevens op basis van bruto
   verbruiksgegevens de reële productinneming overschatten. Deze zijn daarom niet meer
   dan een globale indicatie. Ook is het zo dat de consumptie van bepaalde producten zeer
   sterk uiteen kan lopen in de verschillende Europese lidstaten. In het geval van
   gezondheidsrepen en gezondheidsdranken is de consumptie zelfs onbekend. De
   commissie concludeert dan ook dat de innemingsgegevens beperkt onderbouwd zijn.
   Aan de hand van de gegevens in het dossier heeft de commissie zelf een globale
   inschatting gemaakt van de totale dagelijkse inneming door de Nederlandse consument,
   die uitkomt op gemiddeld 28 g per dag. Dit is gebaseerd op de meest waarschijnlijke
   combinatie van de verschillende ENOVA-olie-houdende levensmiddelen en het gebruik
   als spijsolie (waarvoor 12 g/dag is aangehouden). De commissie wijst er echter op dat
   het onduidelijk blijft, in hoeverre deze inneming representatief is voor consumenten in
   andere EU lidstaten.
        Gegevens over de spreiding van de dagelijkse inneming, en in het bijzonder de
   maximuminneming, zijn juist belangrijk bij de beoordeling van mogelijke nadelige
   effecten bij overschrijding van de veilige bovengrens. Voor zowel de Europese als de
   Nederlands inneming verstrekt de aanvrager alléén gemiddelde waarden. De commissie
   vindt een gemiddelde van de Europese inneming niet bruikbaar, gezien de verschillen in
   eetgewoontes tussen de landen. In aanvulling op het dossier heeft de commissie de
   Nederlandse innemingsgegevens van totaal vet gebruikt om de hoogst mogelijke
   consumptie af te leiden (worst case scenario). Uit voedselconsumptiegegevens van TNO
   (Hul98) blijkt dat de 90 percentiel van de totale vetinneming bij jonge mannen (19-22
24 Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 24 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 25 ======================================================================

<pre>      jaar) 161 g is. Deze bevolkingsgroep verbruikt de meeste energie. Het is echter niet reëel
      te veronderstellen dat al het vet in ons voedsel door diacylglycerolen vervangen zou
      kunnen worden (de aanvrager gaat uit van ongeveer 30% van al het ‘toegevoegde’ vet).
3.5   X Informatie op basis van eerdere blootstelling van de mens aan het NV of
      zijn bron
3.5.1 Huidige blootstelling
      De aanvrager vermeldt dat diacylglycerolen, en in veel mindere mate
      monoacylglycerolen, van nature aanwezig zijn in plantaardige en dierlijke vetten. Dit
      betreft in het bijzonder zaadoliën zoals katoenzaadolie, sojabonenolie, zonnebloemolie,
      olijfolie. Ongeveer 1-10% van het vet in ons dagelijkse voedsel bestaat gewoonlijk uit
      diacylglycerolen. Volgens de commissie krijgt de gewone burger op deze manier zo’n 1-
      10 g diacylglycerolen binnen.
           Monoacylglycerolen en diacylglycerolen zijn internationaal toegestaan als
      voedseladditieven (emulgatoren). Binnen de Europese Unie is dit vastgelegd in Richtlijn
      95/2/EC betreffende levensmiddelenadditieven (EG95). De aanvrager citeert gegevens
      van derden uit 1989, waaruit zou blijken dat de gecombineerde inneming van deze
      diacylglycerolen en monoacylglycerolen 3.6 g per dag is. Volgens een rapport uit 1972
      zou dit liggen tussen de 1 en 10 g. De Joint FAO/WHO Expert Committee on Food
      Additives (JECFA) heeft in 1974 de veiligheid van dit soort ingrediënten geëvalueerd,
      en concludeerde dat het vaststellen van een bovengrens niet nodig was. De maximaal
      toegestane hoeveelheid (ADI, acceptable daily intake) is daarom gedefinieerd als ‘niet
      gespecificeerd’.
           De aanvrager verwijst naar Japan, waar sinds een jaar of drie al diacylglycerololie
      en levensmiddelen met diacylglycerolen worden geconsumeerd. Productgerelateerde
      nadelige gezondheidseffecten zijn niet gerapporteerd.
           Samenvattend concludeert de aanvrager dat de bestanddelen van ENOVA-olie al
      lang deel uit maken van onze dagelijkse voeding, al dan niet kunstmatig toegevoegd.
           De commissie meent dat de JECFA evaluatie van de monoacylglycerolen en
      diacylglycerolen als voedseladditieven maar ten dele relevant is voor de aanvraag in
      kwestie. Volgens de JECFA behoren de hoeveelheden die van deze additieven worden
      toegevoegd niet meer te zijn dan dat wat technisch noodzakelijk is. Daarnaast heeft de
      JECFA zich indertijd voornamelijk beperkt tot de monoacylglycerolen. De commissie
      stelt dat de toepassing van de diacylglycerolen in de ENOVA-olie anders is; als
      vetmacronutriënt vormen deze namelijk een belangrijk onderdeel van de dagelijkse
      voeding.
      Interpretatie en evaluatie van de voorgelegde gegevens                                     25
</pre>

====================================================================== Einde pagina 25 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 26 ======================================================================

<pre>           De commissie erkent dat diacylglycerolen van nature voorkomende chemische
      verbindingen zijn. Ook produceert het menselijk lichaam zelf diacylglycerolen als
      omzettingsproduct van triacylglycerolen, het hoofdbestanddeel van gewoon vet. De
      dagelijks inneming van de diacylglycerololie die de aanvrager voorstelt is van dezelfde
      orde van grootte als de gezamenlijke inneming via natuurlijke vetten en toegevoegde
      emulgatoren. Op grond van de ervaring met de in onze voeding al aanwezige
      diacylglycerolen lijkt het de commissie niet waarschijnlijk dat consumptie van het
      nieuwe product in de toepassing die de aanvrager voorstelt aanleiding geeft tot nadelige
      effecten. Ook de voedingskundige gelijkwaardigheid met traditionele
      triacylglycerololiën ondersteunt deze conclusie (zie paragraaf 3.6). Daarnaast zijn er de
      commissie vanuit de wetenschappelijke biomedische literatuur geen meldingen bekend
      dat diacylglycerolenconsumptie wordt geassocieerd met gezondheidsklachten.
3.5.2 Mensgebonden onderzoek
      In het dossier bespreekt de aanvrager uitgebreid de resultaten van een dertiental
      mensgebonden onderzoeken met de diacylglycerololie, deels bij thema XI
      ‘voedingswaarde’ en deels bij thema XIII ‘toxicologische informatie’. De commissie
      heeft een aantal van deze onderzoeken buiten beschouwing gelaten, omdat
      controlegroepen ontbraken en de blootstelling niet precies bekend was. Zij heeft negen
      onderzoeken geëvalueerd die voor deze veiligheidsbeoordeling het meest relevant zijn.
      Twee hiervan zijn niet gepubliceerd; deze vertrouwelijke bedrijfsrapporten zijn als
      bijlagen bij het dossier verstrekt. De aanvrager geeft in twee tabellen informatie over
      wie het onderzoek gepubliceerd heeft, het aantal deelnemers, de hoeveelheid olie die
      werd toegediend plus de berekende blootstelling, en de duur van de inneming. De
      commissie constateert dat slechts twee van de onderzoeken waren opgezet om de
      veiligheid te evalueren; dit betrof dagelijkse consumptie van diacylglycerololie
      gedurende drie maanden. Vier van de onderzoeken waren opgezet om fysiologische en
      voedingskundige aspecten te bestuderen, terwijl bij drie anderen de (beoogde) effecten
      op het vetmetabolisme zijn beoordeeld.
           De aanvrager vat eerst de resultaten samen van een drietal onderzoeken waarin
      gezonde mannelijke vrijwilligers (10-17 per groep) eenmalig diacylglycerololie kregen
      toegediend. Dit waren allemaal zogeheten cross-over type onderzoeken en waren
      dubbelblind uitgevoerd. De controlegroep kreeg triacylglycerololie van bijna dezelfde
      vetzuursamenstelling. De geteste dosis per groep was 10, 20 of 44 g olie dat in een
      calorierijk drankje werd geëmulgeerd. Nuchter bloed werd afgenomen voorafgaand aan
      het onderzoek; vier en zes uur na olieconsumptie werden opnieuw bloedmonsters
      genomen. De onderzochte kenmerken in het serum omvatten standaard hematologische
      variabelen (aantallen witte en rode bloedlichaampjes en bloedplaatje, Hb, bezinking) en
26    Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 26 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 27 ======================================================================

<pre>   enzymactiviteiten die indicatief zijn voor leverschade (de transferasen GOT, GPT en
   gamma-GPT). Daarnaast werd een uitgebreide set klinisch-chemische variabelen
   beoordeeld, die specifiek op het vetmetabolisme was gericht. Tot deze set behoorden de
   verschillende type lipiden (oa triglyceriden*, totaalcholesterol, veresterd en vrij
   cholesterol, vrije vetzuren, fosfolipiden, β-lipoproteine, lipide peroxide) maar ook
   bijvoorbeeld glucose en insuline. Tevens werd van verschillende
   serumlipoproteïnenfracties (te weten chylomicronen, LDL, VLDL en HDL deeltjes) het
   gehalte aan vetzuren, triacylglycerolen en cholesterol bepaald.
         Vervolgens beschrijft de aanvrager de resultaten van een zestal langer durende
   onderzoeken waarbij de olie dagelijks werd toegediend. Deze onderzoeken zijn allemaal
   gerandomiseerd, dubbelblind uitgevoerd (één van het cross-over type, en 5 parallel) met
   tussen de 8 en 43 gezonde vrijwilligers per groep. Het doel van deze onderzoeken was,
   met uitzondering van de twee veiligheidsonderzoeken, de fysiologische en
   voedingskundige aspecten of de veranderingen in hoeveelheid lichaamsvet te
   bestuderen. Twee van dit laatste type onderzoek betroffen personen met matig of fors
   overgewicht. Gedurende de hele onderzoeksperiode, die varieerde van één tot zes
   maanden, werd dagelijks diacylglycerololie geconsumeerd in hoeveelheden die in de
   verschillende onderzoeksgroepen varieerden van 10 tot 44 g per persoon. De
   controlegroepen kregen triacylglycerololie met identieke of bijna dezelfde
   vetzuursamenstelling als de te testen diacylglycerololie, met uitzondering van één
   onderzoek (waarin wel sprake was van een vergelijkbare calorische waarde). De oliën
   waren voor consumptie geschikt gemaakt, meestal door ze te verwerken in
   levensmiddelen zoals brood, mayonaise, soep, ontbijtproducten, maar ook in kant-en-
   klare lunches of door ze te emulgeren in een drankje. Regelmatig werd, na een nacht
   vasten, bloed afgenomen**. De commissie constateert dat de serumkenmerken alleen in
   de twee veiligheidsonderzoeken uitgebreid zijn beoordeeld. Dezen omvatten uitgebreide
   hematologie (inclusief bloedstollingsparameters) en verschillende enzymactiviteiten om
   te beoordelen of de lever normaal functioneert. Ook werden een groot aantal klinisch-
   chemische testen uitgevoerd, te weten de standaard bepalingen van biochemische
   variabelen (o.a. eiwit, albumine, ureumstikstof, LDH) en mineralen, en de kenmerken
   van het vetmetabolisme (dezelfde set als bij de eenmalige toediening). Daarentegen
   werd in de andere dan veiligheidsonderzoeken maar een beperkt aantal
   vetmetabolismekenmerken meegenomen - naast een uitgebreide beoordeling van
   verschillende lichaamsmaten om veranderingen in vetophopingen te bestuderen.
*  Deze standaard klinisch-chemische term is synoniem met triacylglycerolen
** In alle onderzoeken met de herhaalde innemingen is zogeheten nuchter bloed geanalyseerd. Hierin kunnen dus geen
   specifieke postprandiale effecten worden aangetoond, dwz effecten die optreden enkele uren na inneming.
   Interpretatie en evaluatie van de voorgelegde gegevens                                                          27
</pre>

====================================================================== Einde pagina 27 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 28 ======================================================================

<pre>         Volgens de aanvrager zijn er geen relevante bijzonderheden aan het licht gekomen
    bij de verschillende onderzoeken. Het type en aantal klachten na consumptie van de
    testolie verschilde niet van dat van de controle triacylglycerololie bij doseringen van 0,5
    –0, 7 g olie per kg lichaamsgewicht gedurende 12 of 24 weken (last van de maag,
    misselijkheid, diarree of constipatie maar bijvoorbeeld hoofdpijn en verkoudheden
    kwamen ook voor). Samenvattend stelt de aanvrager dat er geen testproduct gerelateerde
    gezondheidsklachten of andere nadelige effecten gerapporteerd zijn.
         In een drietal onderzoeken met herhaalde blootstelling zijn tevens de concentraties
    van bepaalde afbraakproducten van vetzuren, de zogenaamde ketonen, in het bloed
    geanalyseerd. Hieruit blijkt dat de ketonenconcentratie in het bloed niet significant
    verschilt na langdurige inneming van diacylglycerolen in vergelijking met
    triacylglycerolen.
         De aanvrager stelt dat de mensgebonden onderzoeken duidelijk hebben aangetoond
    dat de diacylglycerololie veilig is, zelfs als dagelijks grote hoeveelheden worden
    geconsumeerd.
         De commissie beschikt over voldoende gegevens om de veiligheid van de
    blootstelling bij mensen te evalueren. Zij heeft negen onderzoeken waarnaar de
    aanvrager verwijst grondig bestudeerd, en meent dat deze van voldoende
    wetenschappelijke kwaliteit zijn. De commissie stelt vast dat bij gezonde vrijwilligers
    met een normaal lichaamsgewicht geen klinisch relevante of significante verschillen
    zijn gevonden na langdurige consumptie van testolie met diacylglycerolen in
    vergelijking met traditionele triacylglycerololie. Op basis van de beschikbare
    mensgebonden onderzoeken stemt de commissie in met de aanvrager dat inneming van
    zo’n 40 g diacylglycerololie per dag geen nadelige effecten op de gezondheid heeft.
3.6 XI Informatie over de voedingswaarde van het NV
    De aanvrager zal de ENOVA-olie op de markt brengen als alternatief voor gewone
    spijsolie. Daarnaast kunnen levensmiddelenfabrikanten het verwerken in verschillende
    soorten levensmiddelen, wat is toegelicht in paragraaf 3.4.
         Op basis van de informatie in wetenschappelijke publicaties geeft de aanvrager eerst
    een kort, algemeen overzicht van het vetmetabolisme. Vervolgens bespreekt hij
    uitgebreid de vertering, de absorptie en het metabolisme van diacylglycerolen. De
    nadruk ligt hierbij op het type chemische verbinding en niet op de individuele vetzuren
    die hetzelfde zijn als die in veelgebruikte plantaardige oliën en vetten. De
    diacylglycerololie ENOVA bestaat hoofdzakelijk uit een mengsel van 1,3-
    diacylglycerolen en 1,2- diacylglycerolen, in een verhouding van 7 : 3 (zie paragraaf
    3.1). Deze verbindingen worden in het maagdarmkanaal door lipasen geheel of
    gedeeltelijk afgebroken, op dezelfde wijze als triacylglycerolen. De aanvrager refereert
28  Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 28 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 29 ======================================================================

<pre>  aan onderzoek bij de rat waaruit blijkt dat de belangrijkste omzettingsproducten 1 (of 3)-
  monoacylglycerolen zijn. Dezen worden vervolgens omgezet in glycerol en in vetzuren,
  die als zodanig geabsorbeerd worden door de darm.
       Het belangrijkste verschil met de vertering van triacylglycerolen* is dat na
  inneming van diacylglycerolen de vorming van 2-monoacylglycerolen beperkt is. De
  aanvrager legt uit dat hierdoor relatief meer vetzuren zullen worden afgebroken waarbij
  energie vrijkomt, in plaats van dat zij als onderdeel van triacylglycerolen bijdragen aan
  vetopslag. Niet alleen bij ratten, maar ook bij mensen is aangetoond dat hierdoor de
  triglyceridenconcentratie in het bloed minder sterk stijgt in de eerste paar uren na
  consumptie van diacylglycerololie (een zogeheten postprandiaal effect), in vergelijking
  met consumptie van traditionele olie met triacylglycerolen.
       De aanvrager refereert aan een recent, degelijk uitgevoerd onderzoek met ratten,
  waaruit blijkt dat de energetisch waarde en biologische beschikbaarheid van
  diacylglycerololie identiek is aan die van triacylglycerololie, mits de
  vetzuursamenstelling vergelijkbaar is. Samenvattend concludeert de aanvrager dat
  inneming van ENOVA-olie bij de voorgestelde toepassing, voedingskundig gezien geen
  enkel nadelig effect zal hebben. De voorziening van essentiële vetzuren is gewaarborgd,
  want de olie bevat naast linolzuur ook α-linoleenzuur. Tevens wordt de beschikbaarheid
  van belangrijke voedingsstoffen en energie niet nadelig beïnvloed, omdat de
  energetische waarde en verteerbaarheid van ENOVA olie gelijk zijn aan die van
  traditionele triacylglycerololiën.
       De commissie stemt in met de conclusie van de aanvrager dat diacylglycerol- en
  triacylglycerololiën voedingskundig gezien gelijkwaardig zijn. De informatie over de
  vertering en het metabolisme van diacylglycerolen in het dossier is voldoende
  onderbouwd met wetenschappelijke gegevens van recente onderzoeken bij
  hoofdzakelijk ratten, maar ook bij mensen.
       De aanvrager bespreekt de mogelijkheid dat de verhoogde vrije
  vetzuurconcentraties na consumptie van diacylglycerololie zou kunnen leiden tot
  onvolledige vertering, waardoor een te veel aan zogeheten ketonlichamen wordt
  geproduceerd. Vanuit voedingsfysiologisch oogpunt acht de commissie het niet
  waarschijnlijk dat dit zal optreden, wat wordt ondersteund door de resultaten van
  verschillende mensgebonden onderzoeken in het dossier (zie paragraaf 3.5). Ook zijn in
  het 105 weken durende toxicologisch onderzoek bij ratten geen bijzonderheden hierover
  aan het licht gekomen.
* Normaliter worden in de darmwandcellen uit geabsorbeerde 2-monoacylglycerolen en vetzuren opnieuw
  triacylglycerolen gevormd, zogeheten endogene triacylglycerolen. Deze worden vervolgens verpakt in chylomicronen
  (lipoproteïnendeeltjes) en komen in de vorm van een fijne emulsie, via de lymfe, in het bloed terecht.
  Interpretatie en evaluatie van de voorgelegde gegevens                                                           29
</pre>

====================================================================== Einde pagina 29 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 30 ======================================================================

<pre>         De gegevens die de aanvrager verstrekt over mogelijke gevolgen van
    diacylglycerolenconsumptie voor vetoplosbare vitamines beperken zich tot één dubbel-
    blind, parallel uitgevoerd onderzoek met 15 mannelijke vrijwilligers. Deze personen
    kregen gedurende twaalf weken dagelijks 20 g diacylglycerololie, verwerkt in
    mayonaise of een drankje. De serumconcentraties van vitamine A, vitamine E
    (tocoferolen) en vitamine D-derivaten waren na vier, acht en twaalf weken niet
    significant verschillend van de controlegroep die triacylglycerololie kreeg. De
    onderzoekers concludeerden dat de absorptie van vetoplosbare vitamines niet nadelig
    wordt beïnvloed. De commissie meent dat het gerapporteerde onderzoek inzake
    vetoplosbare vitamines erg kleinschalig is. Daarbij werd maar een beperkte set
    variabelen beoordeeld; zo ontbraken bijvoorbeeld de carotenoïden (pro-vitamines A).
    Deze kwestie geeft echter geen reden tot bezorgdheid. De commissie verwacht niet dat
    door inneming van diacylglycerolen de opname van vetoplosbare vitamine verandert,
    gezien de voedingskundige gelijkwaardigheid van diacylglycerolen met
    triacylglycerolen.
3.7 XII Microbiologische informatie over het NV
    De aanvrager stelt dat de ENOVA-olie geen aanleiding geeft tot bezorgdheid over
    microbiologische risico’s, gezien het soort productieproces. Uit regelmatige
    productanalyses blijkt dat de microbiologische kwaliteit voldoet aan de normen voor
    voedselveiligheid.
         De commissie vindt een nadere specificatie van dit onderdeel niet relevant. Gezien
    de hoge temperaturen die bij het productieproces worden gebruikt en het geringe
    vochtgehalte van de ENOVA-olie, is het onwaarschijnlijk dat daarin micro-organismen
    aanwezig zijn.
3.8 XIII Toxicologische informatie over het NV
    Diacylglycerololie is onderzocht op mutageniciteit met een in vitro test. Daarnaast zijn
    verschillende toxiciteitstesten uitgevoerd bij ratten. De aanvrager heeft de resultaten
    hiervan in het veiligheidsdossier samengevat. Tevens verwijst hij naar het
    beoordelingsrapport van een groep Amerikaanse deskundigen die deze toxiciteitstesten
    hebben geëvalueerd in verband met de GRAS-aanvraag (zie paragraaf 2.6).
         De mutagene potentie van de nieuwe olie is getest in standaard bacteriële
    mutatietesten met maximaal 5 mg diacylglycerolen per testplaat. Op basis van de
    negatieve resultaten concludeert de aanvrager dat mutagene activiteit geheel afwezig is.
         De acute orale toxiciteit van zowel diacylglycerolen als de diacylglycerololie is
    getest bij ratten. Tien dieren kregen eenmalig 15 g teststof – of raapzaadolie bij de
30  Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 30 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 31 ======================================================================

<pre>controledieren- per kg lichaamsgewicht toegediend via een maagsonde, en werden 14
dagen later aan sectie onderworpen. Nadelige effecten zijn niet waargenomen.
     In het subacute onderzoek kregen ratten gedurende 28 dagen voer met een totaal
vetgehalte van 10%, waarvan 0,2, 1,0 en 5,0% bestond uit diacylglycerolen. Dit
resulteerde in blootstellingen van respectievelijk 0,14, 0,72 en 3,5 g/kg/dag. De
toxicologische effecten zijn geëvalueerd aan de hand van standaard criteria, te weten
klinische observatie, lichaamsgewicht, voederinname, beoordeling van het oog
(ophthalmoscopie), klinisch-chemische (inclusief urine) en hematologische analyses,
orgaangewichten en (histo)pathologische analyses. De resultaten duidden niet op
toxische effecten. Volgens het Amerikaanse beoordelingsrapport bleken enkele
variabelen significant anders bij behandelde ratten (o.a. lagere relatieve nier- of
levergewichten) dan bij controleratten die gevoerd waren met standaard rattenvoer, dat
met maïsolie was aangevuld tot een vetgehalte van 10%. De auteurs concludeerden dat
dit geen behandelingsgerelateerde effecten waren, omdat de betreffende waarden niet
afweken van die in de andere groep controledieren. Deze dieren werden gevoerd met
vetvrij rattenvoer, waaraan, in plaats van de teststof, 5% raapzaadolie (naast 5%
maïsolie) was toegevoegd. Samenvattend concludeert de aanvrager dat toxische effecten
niet zijn waargenomen bij ratten die 5% of minder van de teststof in het voer hadden.
     Als laatste werden de voedingskundige gevolgen en mogelijke toxiciteit onderzocht
bij ratten gedurende chronische blootstelling van twee jaar. Per groep kregen 60
mannelijke en 60 vrouwelijke ratten voer met een totaal vetgehalte van 7%, waarvan
2,65 of 5,3% bestond uit diacylglycerololie. Dit resulteerde in blootstellingen van
respectievelijk 1,18 en 2,35 g/kg/dag bij de vrouwtjes en van respectievelijk 0,89 en
1,77 g/kg/dag bij de mannetjes. Eén controlegroep kreeg voer met 5,3% plantaardige
oliën van vergelijkbare vetzuursamenstelling als de diacylglycerololie. Een tweede
controlegroep kreeg raapzaad- en sojabonenolie door het voer gemengd, met een totaal
vetgehalte van 5,3%. Na 30 en 77 weken werden tien dieren uit elke groep geofferd en
in detail beoordeeld volgens dezelfde criteria als die van een 90 dagen toxicologisch
onderzoek met ratten, inclusief analyse van de urine. Dit gold ook voor alle spontaan
overleden dieren.
     De aanvrager constateert dat het verloop van de natuurlijke sterfte vergelijkbaar was
in alle groepen. Na 105 weken waren nog 10 à 16 dieren in leven van de behandelende
groepen en 10 à 18 van de controlegroepen. Deze dieren werden wel onderworpen aan
sectie, maar niet in detail beoordeeld. De onderzoekers rechtvaardigden dit, omdat er bij
de secties tijdens de onderzoeksperiode geen verschillen waren geconstateerd tussen de
behandelde ratten en de controledieren die konden worden toegeschreven aan
consumptie van de nieuwe olie. De aanvrager bespreekt de resultaten zeer uitgebreid en
concludeert dat chronische blootstelling van 2,35 g/kg/dag niet leidt tot toxicologisch
significante of behandelingsgerelateerde effecten.
Interpretatie en evaluatie van de voorgelegde gegevens                                     31
</pre>

====================================================================== Einde pagina 31 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 32 ======================================================================

<pre>        De commissie concludeert dat de door de aanvrager verstrekte toxiciteitstests
   zorgvuldig zijn uitgevoerd en dat de resultaten overzichtelijk en betrouwbaar zijn
   weergegeven. Zij meent dat zowel de geteste preparaten met puur diacylglycerolen als
   de diacylglycerololiën voldoende representatief zijn voor de commercieel
   geproduceerde ENOVA-olie. Op verzoek van de commissie heeft de aanvrager een
   gedetailleerde productspecificatie verstrekt van de olie die in het chronisch
   toxicologisch onderzoek is getest (ADM02a). Uit deze goed gedocumenteerde gegevens
   blijkt dat de samenstelling van de verschillende partijen van de teststof goed
   overeenkomt met het commerciële product.
        Volgens de commissie heeft de aanvrager de toxicologische onderzoeken correct
   geëvalueerd. De commissie merkt op dat het 105 weken durend onderzoek bij ratten niet
   op alle onderdelen is uitgevoerd volgens de OECD richtlijn van chronisch toxicologisch
   onderzoek, te weten testrichtlijn nr 452. De verkregen informatie is echter voldoende
   voor de veiligheidsbeoordeling van het nieuwe product, omdat volledige toxicologische
   beoordelingen, inclusief histopathologie, zijn uitgevoerd na 30 en 77 weken
   blootstelling aan de diacylglycerololie. Een apart 90 dagen onderzoek bij ratten is
   daarom overbodig. Bij het chronisch toxicologisch onderzoek werden in de behandelde
   groepen incidenteel afwijkende waarden aangetoond van enkele hematologische
   variabelen (o.a. protrombinetijd, aantal bloedplaatjes), klinisch- chemische variabelen
   (o.a. lactaatdehydrogenase, HDL cholesterol, en enkele aminotransfereasen) en orgaan
   gewichten. De aanvrager concludeert terecht dat deze verschillen niet door de teststof
   worden veroorzaakt, omdat ze niet consistent werden waargenomen: de verschillen
   werden bijvoorbeeld bij maar één tijdspunt aangetoond en/of een dosis afhankelijk
   effect was afwezig. Daarnaast gingen deze afwijkingen niet gepaard met
   histopathologische veranderingen.
        Gegevens over effecten op reproductie, ontwikkeling of allergeniteit van de nieuwe
   olie zijn de commissie niet bekend. Zij bevestigt dat de nieuwe diacylglycerololie niet
   mutageen is. Er zijn geen nadelige effecten vastgesteld bij ratten die gedurende 1,5 jaar
   dagelijks aan het nieuwe product waren blootgesteld. Gezien het verschil in blootstelling
   tussen mannelijke en vrouwelijke ratten stelt de commissie de hoogst geteste dosis vast
   op gemiddeld 2 g diacylglycerololie per kg lichaamsgewicht per dag. Zij beschouwt dit
   als de NOAEL (no observed adverse effect level) omdat hierbij geen
   behandelingsgerelateerde effecten zijn waargenomen. Alhoewel de commissie het eens
   is met de aanvrager dat deze dosis de veilige bovengrens van inneming aangeeft,
   gebaseerd op langdurige blootstelling in onderzoek bij ratten, maakt zij bezwaar tegen
   het gebruik van de term ‘ADI’* of wel ‘maximaal toegestane hoeveelheid’. Deze term is
   gereserveerd voor voedseladditieven, bestrijdingsmiddelen en contaminanten, maar niet
   voor voedingsmiddelen en voedselingrediënten, omdat hiervoor geen volledig dossier
32 Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 32 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 33 ======================================================================

<pre>  wordt aangeleverd. Op verzoek van de commissie heeft de aanvrager de tekst van de
  dossiersamenvatting aangepast (zie bijlage D).
       Een aantal mensgebonden onderzoeken die relevant zijn voor de beoordeling van
  ENOVA-olie zijn in paragraaf 3.5 geëvalueerd. Op basis van het totaal aan
  toxicologische gegevens verwacht de commissie geen nadelige gezondheidseffecten bij
  mensen die de olie consumeren in de hoeveelheden die de aanvrager voorstelt.
* De ADI (acceptable daily intake of wel ‘maximaal toegestane hoeveelheid’) is door de Joint FAO/WHO Expert
  Committee on Food Additives (JECFA) gedefinieerd als ‘the amount of a food additive, expressed on a body weight basis
  that can be ingested over a lifetime without appreciable risk’. Op basis van een zeer omvangrijk dossier met de resultaten
  van oa onderzoek van reproductie, teratogeniciteit, chronische toxiciteit en carcinogeniciteit wordt een overall NOAEL
  (no observed adverse effect level) afgeleid. Hiervan kan middels veiligheidsfactoren een ADI worden afgeleid, die op zijn
  beurt kan worden gebruikt voor de afleiding van productnormen door het beleid.
  Interpretatie en evaluatie van de voorgelegde gegevens                                                                 33
</pre>

====================================================================== Einde pagina 33 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 34 ======================================================================

<pre>34 Diacylglycerololie</pre>

====================================================================== Einde pagina 34 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 35 ======================================================================

<pre>       Literatuur
ADM02  Archer Daniels Midland Company. Dossier: ENOVATM oil (diacylglycerol oil) as a novel food ingredient in
       the European Union. Decatur (USA), ADM 2002.
ADM02a Archer Daniels Midland Company. Brief van 30 augustus 2002 met aanvullende informatie ter
       beantwoording van vragen van de commissie Veiligheidsbeoordeling nieuwe voedingsmiddelen. Decatur
       (USA), ADM 2002.
EG97   Verordening (EG) Nr. 258/97 van het Europees parlement en de Raad van 27 januari 1997 betreffende
       nieuwe voedingsmiddelen en nieuwe voedselingrediënten. Publikatieblad van de Europese
       Gemeenschappen 1997; L43: 1-6.
EG97a  97/618/EG: Aanbeveling van de Commissie van 29 juli 1997 betreffende de wetenschappelijke aspecten en
       de presentatie van de informatie die nodig is om aanvragen voor het in de handel brengen van nieuwe
       voedingsmiddelen en nieuwe voedselingrediënten te ondersteunen alsmede het opstellen van de verslagen
       van de eerste beoordeling uit hoofde van Verordening (EG) nr. 258/97 van het Europees Parlement en de
       Raad. Publikatieblad van de Europese Gemeenschappen 1997; L253: 1-36.
EG00   Richtlijn 2000/13/EG van het Europese Parlement en de Raad van 20 maart 2000 betreffende de onderlinge
       aanpassing van de wetgeving der lidstaten inzake de etikettering en presentatie van levensmiddelen alsmede
       inzake de daarvoor gemaakte reclame. Publicatieblad van de Europese Gemeenschappen 2000; L109: 29-
       42.
EG93   Richtlijn 93/43/EEG van de Raad van 14 juni 1993 inzake levensmidddelenhygiëne. Publicatieblad van de
       Europese Gemeenschappen 1993; L175: 1-11.
EG95   Richtlijn 95/2/EG van het Europees Parlement en van de Raad van 20 februari 1995 betreffende
       levensmiddelenadditieven met uitzondering van kleurstoffen en zoetstoffen. Publicatieblad van de Europese
       Gemeenschappen 1995; L61: 1 – 40.
       Literatuur                                                                                                 35
</pre>

====================================================================== Einde pagina 35 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 36 ======================================================================

<pre>FAO96  Biotechnology and Food Safety. Report of a joint FAO/WHO Consultation. Rome, FAO 1996.
FAO01  Evaluation of allergenicity of genetically modified foods. Report of a joint FAO/WHO expert consultation
       on allergenicity of foods derived from biotechnology. Rome, FAO 2001.
FSA00  Assessment report by the Food Standards Australia New Zealand (FSANZ): Lipase from genetically
       modified aspergillus oryzae, Application A402. http://www.foodstandards.gov.au/standardsdevelopment/
       applications/index.cfm
GR02   Gezondheidsraad. Enkele belangrijke ontwikkelingen in de voedselconsumptie. Den Haag:
       Gezondheidsraad, 2002; publicatie nr 2002/12
GR92   Commissie Toxicologische aspecten van biotechnologisch bereide producten. Productveiligheid bij nieuwe
       biotechnologie. Den Haag, Gezondheidsraad 1992, publicatienummer 1992/03.
Hul98  Hulshof KFAM, Kistemaker C, Bouman M. De inname van energie en voedingstoffen door Nederlandse
       bevolkingsgroepen – Voedselconsumptiepeilingen 1997–1998. TNO-rapport V98.805, Zeist, 1998.
OECD93 Safety evaluation of foods derived by modern biotechnology. Concepts and principles. Paris, OECD 1993.
OECD96 OECD Workshop on Food Safety Evaluation. Paris, OECD 1996.
OECD98 Report of the OECD workshop on the toxicological and nutritional testing of novel foods. Paris, OECD
       1998.
OECD00 Report of the task force for the safety of novel foods. Paris, OECD 2000.
Par01  Pariza MW, Johnson EA. Evaluating the safety of microbial enzyme preparations used in food processing:
       update for a new century. Regulatory Toxicol Pharmacol 2001; 33: 173-186.
SCF92  Guidelines for the presentation of data on food enzymes (Opinion expressed on 11 April 1991). Brussels,
       Scientific Committee on Food of the EU 1992.
SCF99  Opinion concerning the scientific basis for determining whether food products, derived from genetically
       modified maize, could be included in a list of food products which do not require labelling because they do
       not contain (detectable) traces of DNA or protein. Brussels, Scientific Committee on Food of the EU 1999.
SSC99  Opinion of the Scientific Steering Committee on microbial resistance, Brussels, Scientific Steering
       Committee of the EU 1999.
WHO91  Strategies for assessing the safety of foods produced by biotechnology. Report of a joint FAO/ WHO
       consultation. Geneva, WHO 1991.
WHO00  Safety aspects of genetically modified foods of plant origin. Report of a joint FAO/WHO expert
       consultation on foods derived from biotechnology. Geneva, WHO 2000.
36     Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 36 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 37 ======================================================================

<pre>A De adviesaanvraag
B De commissie
C EU-procedure
D Samenvatting van het dossier
  Bijlagen
                               37
</pre>

====================================================================== Einde pagina 37 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 38 ======================================================================

<pre>38 Diacylglycerololie</pre>

====================================================================== Einde pagina 38 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 39 ======================================================================

<pre>Bijlage A
        De adviesaanvraag
        Op 18 augustus 1999 schreef de Minister van Volksgezondheid, Welzijn en Sport aan de
        Voorzitter van de Gezondheidsraad (brief kenmerk GZB/VVB 993428):
        Sinds mei 1997 is in de Europese Unie de Verordening (EG) 258/97 van kracht inzake nieuwe
        voedingsmiddelen en nieuwe voedselingrediënten. Daarmee werd de veiligheidsbeoordeling onderdeel van
        een communautaire procedure.
             Met u is reeds de mogelijkheid besproken de beoordeling door de Gezondheidsraad te laten uitvoeren.
        Ik verzoek u dan ook mede namens de Staatssecretaris van Landbouw, Natuurbeheer en Visserij, in deze
        eerste fase van uitvoering van de Europese Verordening (EG) 258/97 gedurende een aantal jaren, de
        veiligheidsbeoordeling gestalte te geven. Voor het onderbrengen bij de Gezondheidsraad pleit het
        experimentele karakter dat de beoordeling de eerste jaren zal hebben. Dit experimentele karakter komt voort
        uit het feit dat het een nieuw soort beoordeling betreft van deels nieuwe categorieën van voedingsmiddelen
        of voedselingrediënten. Het is namelijk een veiligheidsbeoordeling vóór het op de markt brengen van met
        name voedingsmiddelen van een genetisch gemodificeerde oorsprong en zogenaamd functional foods
        (nutriceutica). Daarnaast ga ik ervan uit dat de onafhankelijke wetenschappelijke advisering door de
        Gezondheidsraad het vertrouwen van de Europese Commissie en de andere lidstaten in het Nederlandse
        oordeel nog versterkt.
             Mijn beleid is erop gericht een zo groot mogelijke openheid en transparantie te realiseren van de
        gevolgde procedure en de beoordeling om de consument vertrouwen te geven in de veiligheid van de
        De adviesaanvraag                                                                                           39
</pre>

====================================================================== Einde pagina 39 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 40 ======================================================================

<pre>   nieuwe voedingsmiddelen. Ik verzoek de Gezondheidsraad hieraan bij te dragen door bijvoorbeeld inzage te
   geven in de dossiers waarvoor een aanvraag wordt ingediend, waarbij uiteraard bedrijfsvertrouwelijke
   gegevens worden beschermd en door de criteria, waarop de veiligheid zal worden beoordeeld, te publiceren.
   De Minister van Volksgezondheid, Welzijn en Sport,
   w.g. dr E Borst-Eilers
40 Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 40 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 41 ======================================================================

<pre>Bijlage B
        De commissie
        •  Prof. dr LM Schoonhoven, voorzitter
           emeritus hoogleraar entomologie; Wageningen Universiteit en Researchcentrum
        •  Prof. dr CAFM Bruijnzeel-Koomen
           hoogleraar dermatologie/allergologie; Academisch Ziekenhuis Utrecht
        •  Ir EJ Kok
           toxicoloog; RIKILT-DLO Wageningen
        •  Dr CF van Kreijl
           moleculair-bioloog; RIVM Bilthoven
        •  Prof. dr P van der Laan
           hoogleraar statistiek; Technische Universiteit Eindhoven
        •  Dr B Loos, adviseur
           COGEM, Den Haag
        •  Dr F Nagengast
           gastro-enteroloog; Academisch Ziekenhuis Nijmegen
        •  Dr JMA van Raaij
           voedingsfysioloog; Wageningen Universiteit and Researchcentrum
        •  Prof. dr G Schaafsma
           hoogleraar voeding; TNO Voeding, Zeist
        •  Prof. dr EG Schouten
           hoogleraar epidemiologie; Wageningen Universiteit and Researchcentrum
        •  Dr GJA Speijers
           toxicoloog; RIVM Bilthoven
        De commissie                                                                   41
</pre>

====================================================================== Einde pagina 41 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 42 ======================================================================

<pre>   •  Prof. dr WJ Stiekema
      hoogleraar bioinformatica; Wageningen Universiteit en Researchcentrum
   •  Ir R Top, adviseur
      Ministerie van VWS; Den Haag
   •  Prof. dr WM de Vos
      hoogleraar microbiologie; Wageningen Universiteit en Researchcentrum
   •  Dr RA Woutersen
      Toxicoloog; TNO Voeding, Zeist
   •  Dr ir M Rutgers, secretaris
      Gezondheidsraad, Den Haag
   Administratieve ondersteuning: CL Vuijst; Gezondheidsraad, Den Haag
   Lay-out: J van Kan; Gezondheidsraad, Den Haag
42 Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 42 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 43 ======================================================================

<pre>Bijlage C
        EU-procedure
        Als een fabrikant een nieuw voedingsmiddel op de markt brengt, dient de veiligheid
        voor de consument gewaarborgd te zijn. In 1997 werd de Europese verordening van
        kracht waarin de procedure is geregeld voor de goedkeuring voor marktintroductie van
        een nieuw voedingsmiddel (EG97). Bij deze procedure zijn verschillende actoren
        betrokken. De aanvrager moet beoordelen of het product werkelijk 'nieuw' is, dat wil
        zeggen dat het nog niet eerder in de Europese Unie in substantiële mate voor menselijke
        voeding is gebruikt en ook niet wezenlijk gelijkwaardig is aan een bestaand product.
        (Voor een wezenlijk gelijkwaardig product kan worden volstaan met een kennisgeving
        van de marktintroductie.) Ook moet het niet gaan om een levensmiddelenadditief, aroma
        of extractiemiddel, omdat deze producten op een andere wijze worden beoordeeld. Voor
        een nieuw voedingsmiddel in de zin van de Europese verordening moet de aanvrager
        een veiligheidsdossier overleggen volgens aanbevelingen van de Europese Commissie
        (EG97a). Deze aanbevelingen zijn gebaseerd op rapporten van verschillende instanties
        die zich met het onderwerp nieuwe voedingsmiddelen bezighouden, te weten de OECD
        (OECD93, OECD96) en de WHO/FAO (FAO96, WHO91). Ook de Gezondheidsraad
        heeft zich al eerder over dit onderwerp gebogen (GR92). Sinds het verschijnen van de
        aanbevelingen van de EU wordt in internationaal verband gewerkt aan explicitering en
        aanpassing aan de stand van de wetenschap (FAO01, OECD98, OECD00, SCF99,
        SSC99, WHO00).
            De fabrikant levert het volgens de richtlijnen samengestelde dossier in bij het land
        waar het product het eerst op de markt zal komen. Daarop komt de nationale
        veiligheidsbeoordelingsautoriteit in actie. In Nederland is dat de Minister van
        EU-procedure                                                                             43
</pre>

====================================================================== Einde pagina 43 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 44 ======================================================================

<pre>   Volksgezondheid, Welzijn en Sport. Zij heeft de Gezondheidsraad verzocht haar van
   advies te dienen. De Voorzitter van de Gezondheidsraad heeft hiertoe de commissie
   Veiligheidsbeoordeling nieuwe voedingsmiddelen (commissie VNV) ingesteld.
       De commissie beoordeelt op basis van de huidige stand van de wetenschap of de
   door de fabrikant geleverde gegevens juist en volledig zijn en of zij het eens is met diens
   conclusies. Zij maakt een verslag van haar bevindingen — ook volgens de Europese
   aanbevelingen (EG97a, deel III) — en biedt dat de minister aan. De minister formuleert
   het Nederlandse oordeel over een voedingsmiddel en brengt dat in bij het Europese
   overleg in het Permanent Comité voor de voedselketen en de diergezondheid. Alle
   Europese lidstaten worden uitgenodigd hun oordeel (de zogeheten tweede beoordeling)
   te geven over het dossier en over de eerste beoordeling alvorens genoemd Comité een
   eindoordeel velt. Als een dossier veel vragen oproept, gaat er een adviesvraag van de
   Europese Commissie naar het Wetenschappelijk Comité voor de menselijke voeding.
   Komt men dan nog niet tot overeenstemming dan beslist de Europese Ministerraad.
44 Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 44 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 45 ======================================================================

<pre>Bijlage D
        Samenvatting van het dossier
        Samenvatting van het dossier 45
</pre>

====================================================================== Einde pagina 45 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 46 ======================================================================

<pre>46 Diacylglycerololie</pre>

====================================================================== Einde pagina 46 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 47 ======================================================================

<pre>New Revised Summary of
the ENOVA™ Oil Petition

ENOVA™ OIL (DIACYLGLYCEROL OIL) |
AS A NOVEL FOOD INGREDIENT
IN THE EUROPEAN UNION

A Novel Food Application presented to
The European Union (The Netherlands)
by:
</pre>

====================================================================== Einde pagina 47 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 48 ======================================================================

<pre>SUMMARY

In accordance with the European Union Novel Food Regulations (EC-258/97), Archer Daniels
Midland Company (Decatur, Illinois) is applying for the approval to place ENOVATM oil, a healthier
dietary oil, on the European Union market as a novel food ingredient. ENOVATM oil, also referred to
as Diacylglycerol Oil (DAG-oil), is a mixture of approximately 80% diacylglycerol (DAG), 20%
triacylglycerol (TAG) and less than 5% monocylglycerol (MAG). The terms ENOVATM oil and

DAG-oil will be used interchangeably throughout this document.

The intended use of ENOVA™ oil (DAG-oil) is for home use as cooking oil and as an ingredient for
fat spreads/margarine, dressing for salads/mayonnaise, bakery products (bread, biscuits, croissants,

pastries, cakes, crackers and cookies), yogurt, health bars and health drinks (meal replacers).

The main component of ENOVA™ oil is DAG. The DAG molecules are produced as predominantly
1,3 - DAG (approximately 70%), with smaller amounts (approximately 30%) as 1,2 - DAG. The
individual fatty acid side chains are esterified randomly into these positions. Oleic acid (C18:1),
linoleic acid (C18:2) and linolenic acid (C18:3) are the main fatty acid components of DAG and are

derived primarily from soybean (Glycine max) and rapeseed (Brassica campestris) oils.

DAG is produced by esterification of the already mentioned fatty acids with either monoacylglycerol

or glycerol in the presence of an immobilized lipase enzyme (Lipozyme IM®, Novo Nordisk).
</pre>

====================================================================== Einde pagina 48 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 49 ======================================================================

<pre>From the nutritional point of view, ENOVA™ oil (DAG-oil) will be used as a replacement for the
customary cooking oil and as an ingredient of the already indicated food categories. The
introduction of ENOVA™ oil (DAG-oil) into the European diet will not impair or limit the
availability of essential nutrients, important natural dietary components or energy. This is due to the
following reasons: a) DAG-oil has about the same energy value and digestibility as TAG or
customary oil (9 Keal/g): b) The main fatty acid components in DAG-oil are the essential fatty acids
Linoleic (15-65%) and Linolenic (about 15%). Thus, DAG-oil will not limit the dietary provisions of
these important nutrients; and c) The consumption of DAG-oil does not interfere with the

bioavailability of vitamins or impair their intestinal absorption or normal metabolism.

The safety of ENOVA™ (DAG-oil) has been based on the following:

a) Thereis a history of previous human exposure to partial glycerides (MAG and DAG) from
both, natural sources (primarily seed oils) and as additives (emulsifiers) used in the food
industry. |

b) DAG-oil and related DAG products have been consumed by the general population in
Japan for over 3 years. No serious adverse effects have been reported.

c) There are several toxicological studies in experimental animals, that include acute, sub-
acute and chronic exposure investigations that demonstrate the safety of DAG-oil, even at
levels as high as 2.35 g/kgBW (equivalent to 165 g for a 70 kg reference person).

d) Experimentally, it has been shown that DAG-oil is not mutagenic.

e) There are 15 different completed human clinical trials that have been conducted using DAG
or DAG-oil at various levels as high as 45 g/day (0.64 2/kgBW) for periods up to one year
and no clinically important adverse effects have been observed. These studies include

investigations on nörmal adults and children, diabetic individuals and subjects undergoing
</pre>

====================================================================== Einde pagina 49 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 50 ======================================================================

<pre>hemodialysis.

f) A panel of scientific experts in the United States has recently evaluated the existing scientific
data on the use of DAG and DAG-oil, concluding that these compounds are safe.
Furthermore, that DAG-oil has been accepted for safe use by the U.S. FDA as cooking oil and
as an ingredient in margarine/fat spreads. This evaluation has been the basis for gaining
GRAS status. Further expansion of the original categories is now being pursued with the
U. S. FDA. |

g) Previous safety evaluations of partial glycerides (DAG and MAG) by the Joint Executive
Committee on Food Additives (JECFA) and the Federation of American Society for

Experimental Biology (FASEB) have also determined that diglycerides are safe for human

use.
h) It has been estimated that in the Netherlands the potential average DAG-oil consumption
would be about 38 g/person/day (0.54 g/kg/BW), and in the EU such consumption would be
| 51 g/person/day (0.73 g/kgBW). Due to the method of calculation, these consumption figures

overestimate what may occur in practice.

Animal safety studies show that ENOVA™ oil can be consumed on a long term basis at a
tolerable upper intake level of 2.35 g/kg-BW/day, which for a 70 kg BW reference person is
eguivalent to 165 g/day. Therefore, all this information leads to the conclusion that ENOVA™
oil (DAG-oil) can be safely consumed in Europe as cooking oil and as an ingredient in the
proposed food categories under conditions of normal food use. Thus, ENOVATM oil (DAG-oil)

meets the requirements to be cleared as Novel food ingredient in the E.U.
</pre>

====================================================================== Einde pagina 50 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 51 ======================================================================

<pre>Diacylglycerol oil
Assessment of safety for the consumer, in accordance with European
Regulation 258/97 concerning novel foods and novel food ingredients
</pre>

====================================================================== Einde pagina 51 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 52 ======================================================================

<pre></pre>

====================================================================== Einde pagina 52 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 53 ======================================================================

<pre>Letter to the Dutch Minister of Health,
Welfare and Sport
On December 12, 2002, professor dr JGAJ Hautvast, Vice-President of the Health
Council of the Netherlands wrote as follows to the Minister of Health, Welfare and
Sport:
Herewith I present you an advisory report that is prepared in response to your request for
advice regarding the safety of diacylglycerol oil for the consumer, also made on behalf
of the Minister of Agriculture, Nature management and Fisheries. This advice is a so
called initial assessment in the context of European Regulation (EC) 258/97, concerning
novel foods and novel food ingredients. The assessment is carried out by the Committee
on the Safety Assessment of Novel Foods of the Health Council of the Netherlands.
     This advisory report is also presented to the Minister of Agriculture, Nature
Management and Fisheries.
Signed
professor dr JGAJ Hautvast
</pre>

====================================================================== Einde pagina 53 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 54 ======================================================================

<pre></pre>

====================================================================== Einde pagina 54 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 55 ======================================================================

<pre>Diacylglycerol oil
Assessment of safety for the consumer, in accordance with European
Regulation 258/97 concerning novel foods and novel food ingredients
Health Council of the Netherlands:
Committee on the Safety Assessment of Novel Foods
to:
the Minister of Health, Welfare and Sport
the Minister of Agriculture, Nature Management and Fisheries
No. 2002/07VNV, The Hague, December 12, 2002
</pre>

====================================================================== Einde pagina 55 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 56 ======================================================================

<pre>The Health Council of the Netherlands, established in 1902, is an independent scientific
advisory body. Its remit is “to advise the government and Parliament on the current level
of knowledge with respect tot public health issues” (Section 21, Health Act).
     The Health Council receives most requests for advice from the Ministers of Health,
Welfare & Sport; Housing, Spatial Planning & the Environment; Social Affairs &
Employment, and Agriculture, Nature management & Fisheries.
     Most Health Council reports are prepared by multidisciplinary committees of Dutch
or, sometimes, foreign experts, appointed in a personal capacity. The reports are
available to the public.
Preferred citation:
Health Council of the Netherlands: Committee on the Safety Assessment of Novel
Foods. ‘Diacylglycerol oil’. The Hague: Health Council of the Netherlands, 2002;
publication no. 2002/07VNV.
all rights reserved
A public version of this advisory report can be found on the website of the Health
Council of the Netherlands: www.healthcouncil.nl.
</pre>

====================================================================== Einde pagina 56 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 57 ======================================================================

<pre>    Contents
    Executive summary and conclusions 59
1   Introduction 63
2   Completeness and accuracy of the dossier 65
2.1 Administrative data 65
2.2 General description of the food 65
2.3 Classification of the food for assessment 65
2.4 Information on the food 66
2.5 Brief summary by the applicant 67
2.6 Other assessments 67
2.7 Proposal for labelling by the applicant 67
3   Interpretation and evaluation of the data submitted 69
3.1 I Specification of the novel food (NF) 69
3.2 II Effects of the production process applied to the NF 70
3.3 III History of the organism used as the source of the NF 72
3.4 IX Anticipated intake and extent of use of the NF 72
3.5 X Information from previous human exposure to the NF or its source 75
3.6 XI Nutritional information on the NF 78
3.7 XII Microbiological information on the NF 80
3.8 XIII Toxicological information on the NF 80
    Contents                                                              57
</pre>

====================================================================== Einde pagina 57 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 58 ======================================================================

<pre>   Literature 83
   Annexes 85
A  Request for advice 87
B  The committee 89
C  EU-procedure 91
D  Executive summary of the dossier 93
58 Diacylglycerololie
</pre>

====================================================================== Einde pagina 58 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 59 ======================================================================

<pre>Executive summary and conclusions
The applicant, Archer Daniels Midland Company (ADM), has compiled a safety dossier
on ENOVA oil. This novel vegetable oil mainly consists of diacylglycerols and in terms
of its constitution, the oil differs from traditional oils that are made up of
triacylglycerols. ENOVA oil is manufactured from glycerol and fatty acids using a
specific lipase enzyme in the manufacturing process. The fatty acids are obtained from
common edible oils. The dossier submitted by the applicant to the Committee on Safety
Assessment of Novel Foods contains sufficient chemical, biochemical, nutritional and
toxicological information for an assessment to be carried out.
     The ADM company has requested approval for ENOVA oil to be placed on the
European market as a novel food ingredient. The oil can be used as a replacement for the
usual fats and oils in various types of foods. The applicant proposes the following
categories: spreadable fats, salad dressings, confectionery products, yoghurt, health bars
and health drinks. Another intended application of the ENOVA oil would be for home
use as cooking oil.
     First of all, the Committee concludes that there is limited support for the intended
intake data. The applicant provides data of the consumption by European and Dutch
people. In both cases, however, only average values are given. The Committee believes
that an average intake for all European citizens is not a useable figure in view of the
dietary differences between the member states. For the Netherlands, the Committee
itself estimated a total daily intake using the data provided by the applicant. Based on
the most likely combination of different ENOVA-oil-containing products, average
Dutch consumers would have an intake of 28 grams per day.
Executive summary and conclusions                                                          59
</pre>

====================================================================== Einde pagina 59 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 60 ======================================================================

<pre>        Diacylglycerols are natural components of animal and vegetable fats. The human
   body also produces diacylglycerols, as metabolites of triacylglycerols. Moreover, for
   many years these compounds have been added to a wide range of foods, as emulsifying
   agents. The Committee concludes that the daily intake of ENOVA oil proposed by the
   applicant is of the same order of magnitude as the combined intake of diacylglycerols
   via natural fats and added emulsifying agents. Furthermore, the Committee is not aware
   of any report from the scientific literature in which consumption of diacylglycerols has
   been associated with health complaints.
        The information contained in the dossier on the digestion and metabolism of
   diacylglycerols is adequately supported by scientific data from recent studies in which
   mostly rats but also human subjects were used. The provision of essential fatty acids
   seems safeguarded, since the oil contains both linoleic acid and alpha-linolenic acid.
   The Committee is in agreement with the applicant’s conclusion that, in nutritional terms,
   ENOVA oil is equivalent to traditional triacylglycerol oils. The Committee also concurs
   with the applicant’s statement that the consumption of diacylglycerol oil does not result
   in health problems or other adverse effects. This view is based on the results of studies
   on human subjects, which were contained in the dossier. The Committee has determined
   that, in the case of healthy volunteers with a normal body weight, no clinically relevant,
   significant differences were found between long-term consumers of ENOVA oil and
   those consuming traditional triacylglycerol oil.
        The Committee has set the safe level of exposure to ENOVA oil at a maximum of
   140 grams per 70 kilograms of body weight per day. The dossier contains sufficient
   toxicological information on ENOVA oil to support this conclusion. The results of an in
   vitro mutagenicity test were negative. No adverse effects were found in rats which were
   daily fed over a period of 18 months, with a diet containing the novel oil at
   concentrations of 2.65% or 5.3%. The Committee has calculated the highest level of
   exposure used in this study as the average of the value of male and female rats. This
   amounts to, on average, 2 grams of diacylglycerol oil per kilogram of body weight per
   day. It therefore regards this as the NOAEL (no observed adverse effect level), since no
   test oil related effects were observed at this level of exposure.
        On the basis of the entire body of data, the Committee concludes that the novel oil is
   safe for human consumption. The arguments are summarised below.
   • Exposure to diacylglycerols already exists. An average consumer does ingest a
        significant amount of diacylglycerols as part of the normal diet. For the use of
        ENOVA oil proposed by the applicant, the consumption of diacylglycerols will
        increase two to five folds. Furthermore, the major components after hydrolysis of
        ENOVA oil in the gastrointestinal tract, i.e. the fatty acids, are the same as those in
        customary edible oils.
60 Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 60 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 61 ======================================================================

<pre>•  Studies using volunteers have shown that a long-term, daily intake of about 40
   grams of diacylglycerol oil has no other effects on health than similar consumption
   of traditional triacylglycerol oils.
•  For humans, the safe upper intake level is set at 140 grams of diacylglycerol oil per
   70 kilograms of body weight per day (i.e. 2 g/kg/day), based on the results of
   chronic studies in experimental animals.
•  The Committee has used the information on total fat intake in the population of the
   Netherlands to estimate the highest possible consumption. Food consumption data
   obtained by TNO Nutrition and Food Research shows that the 90th percentile of the
   total fat intake in the subpopulation which uses the most energy, being men aged
   from 19 to 22, is 161 grams. It is not realistic to suppose, however, that the total fat
   content of our diet could be replaced by diacylglycerols. The Committee therefore
   considers it unlikely that consumption of ENOVA oil would exceed the safe upper
   intake level.
Executive summary and conclusions                                                           61
</pre>

====================================================================== Einde pagina 61 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 62 ======================================================================

<pre>62 Diacylglycerol oil</pre>

====================================================================== Einde pagina 62 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 63 ======================================================================

<pre>Chapter 1
        Introduction
        On 17 April 2002, the Minister of Health, Welfare and Sport requested the advice of the
        Committee on Safety Assessment of Novel Foods (VNV), hereafter referred to as ‘the
        Committee’, concerning the safety to consumers of a diacylglycerol oil known as
        ‘ENOVA oil’. The fatty acids in this novel oil are derived from normal edible oils, but
        the chemical structure of the fat components differs from that of traditional oils. The
        ADM company has therefore seeked permission for market introduction, in accordance
        with Regulation (EC) No. 258/97 of the European Parliament and of the Council,
        concerning novel foods (annex C). The presumed health-promoting action of the novel
        oil is one of the reasons for introducing it to the market. In this connection, the applicant
        mentions cardiovascular diseases, atherosclerosis, overweight and diabetes. The VNV
        Committee stresses that an evaluation of health claims does not fall within the scope of
        this safety assessment.
             Details of the ENOVA oil assessment procedure are given below. The dossier
        compiled by the applicant, which contained an assessment of the novel product’s safety
        (ADM02), was first discussed by the Committee in July 2002. On 25 July 2002, the
        Committee submitted several questions to the company. The most important of these
        related to a) the enzyme used in the production process and b) the specifications of the
        products administered in the experimental animal studies and in those involving human
        subjects. On 30 August 2002, supplementary information was provided by the applicant
        (ADM02a). After repeated consultation with the applicant regarding a number of points
        in the response, the Committee completed the assessment when it met in November
        2002. This advisory report contains its findings.
        Introduction                                                                                  63
</pre>

====================================================================== Einde pagina 63 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 64 ======================================================================

<pre>64 Diacylglycerol oil</pre>

====================================================================== Einde pagina 64 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 65 ======================================================================

<pre>Chapter 2
        Completeness and accuracy of the
        dossier
2.1     Administrative data
        The name and address of the applicant is as follows: ADM Kao LLC, 4666 Faries
        Parkway, Decatur, IL, 62526, USA. ADM (Archer Daniels Midland Company), has
        entered into a joint venture ADM Kao LLC, that manufactures the ENOVA oil in the
        US.
2.2     General description of the food
        ENOVA oil is prepared from common edible oils using enzyme technology. It consists
        mainly of diacylglycerols (synonymous with diglycerides). In this respect the novel oil
        differs from traditional vegetable oils, which mainly consist of triacylglycerols
        (synonymous with triglycerides). The major fatty acids in ENOVA oil are oleic acid and
        linoleic acid. Not only does the applicant plan to position the oil on the market as
        ordinary edible oil, he also wants food producers to incorporate it into various end
        products. The applicant proposes the following categories for this purpose: spreadable
        fats (including margarine), salad dressings (including mayonnaise), bakery products,
        yoghurt, health bars and health drinks (see Annex D).
        Completeness and accuracy of the dossier                                                65
</pre>

====================================================================== Einde pagina 65 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 66 ======================================================================

<pre>2.3 Classification of the food for assessment
    The applicant submits a proposed classification as part of theme III, ‘History of the
    source organism used for the production of the diacylglycerol oil’. It is proposed that the
    novel product should be placed in class 1, sub-class 1.1, as described in part I of
    European Commission Recommendation 97/618 (EC97a). This means that it is a simple
    mixture of chemical substances, derived from non-genetically modified sources, and
    that these sources have been previously used for foods within the European Community.
         The Committee concurs with the applicant that the novel oil falls into category e
    ‘foods isolated from plants’ of the novel food regulation (EC97). The Committee does
    not concur with classification into sub-class 1.1. This is because the applicant has stated
    that there is a possibility that some of the starting material may come from genetically
    modified sources, given the range of seed oils currently available on the global market.
    The Committee therefore concludes that the current classification (EC97a) is
    inappropriate for the product in question. Further information can be found in section
    3.3.
2.4 Information on the food
    The applicant structures the information essential to the assessment of novel food
    consumption in accordance with the themes prescribed in European Commission
    Recommendation 97/618 (EC97a).
    I    Specification of the novel food (NF)
    II   Effects of the production process applied to the NF
    III History of the organism used as the source of the NF
    IX Anticipated intake and extent of use of the NF
    X    Information from previous human exposure to the NF or its source
    XI Nutritional information on the NF
    XII Microbiological information on the NF
    XIIIToxicological information on the NF
66  Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 66 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 67 ======================================================================

<pre>    The applicant presents a well-organised discussion of each of these topics. For details of
    the data used, the applicant refers the reader either to the appendices or to appropriate
    scientific articles. The dossier contains sufficient chemical, biochemical, nutritional and
    toxicological information for an assessment of the safety of the NF to be carried out. The
    Committee has also consulted scientific literature in the field of biomedicine.
2.5 Brief summary by the applicant
    The dossier includes a brief summary that has been sent to the member states, as
    required under Article 6, paragraph 2 of European Regulation (EC) 258/97 (EC97).
2.6 Other assessments
    In May 1998, the Japanese government granted Kao Corporation permission to place the
    novel diacylglycerol oil on the Japanese market. The name of the commercial product is
    ‘Econa® oil’. In addition to its use as a cooking oil, diacylglycerol oil is being
    incorporated into margarine, salad dressing, canned tuna, some baked goods and curry-
    roux.
        In December 2000, Kao Corporation’s diacylglycerol oil was given GRAS status
    (Generally Recognised As Safe) by the Food and Drug Administration in the United
    States of America (US FDA). The report by the American experts who assessed the
    safety of this oil has been included in the present dossier, as appendix 15. This relates to
    the applicant’s proposal that the product in question be used as an edible oil and as an
    ingredient in margarine-like products. The joint company consisting of ADM and KAO
    Corporation will market the oil in the United states of America under the name of
    ‘ENOVATM oil’.
2.7 Proposal for labelling by the applicant
    Labelling should comply with Directive 2001/13/EC (EC00) and Article 8 of European
    Regulation (EC) 258/97 (EC97). No assessment is given on this in the present report, as
    labelling proposals are discussed by the Regular Consultations on the Commodity Act in
    the Netherlands.
    Completeness and accuracy of the dossier                                                     67
</pre>

====================================================================== Einde pagina 67 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 68 ======================================================================

<pre>68 Diacylglycerol oil</pre>

====================================================================== Einde pagina 68 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 69 ======================================================================

<pre>Chapter 3
        Interpretation and evaluation of the data
        submitted
3.1     I Specification of the novel food (NF)
        ENOVA oil consists largely of diacylglycerols. The major fatty acids are oleic acid and
        linoleic acid. The applicant specifies his product as follows:
        • diacylglycerol >80%
        • triacylglycerol <20%
        • monoacylglycerol <5%
        • unsaturated fatty acids
             oleic acid 20-65%
             linoleic acid 15-65%
             alpha-linolenic acid <15%
        • saturated fatty acids (palmitic acid and stearic acid) <10%
        The majority of the diacylglycerols (70%), the so-called 1,3 diacylglycerols, have no
        fatty acid esterified to the middle carbon atom of the glycerol chain. The remaining 30%
        consist of 1,2 (or 2,3) diacylglycerols. The product also contains small amounts of
        antioxidants <0.2% (ascorbyl palmitate, tocopherol mixture) and free fatty acids
        (<0.2%). The maximum phytosterol content is 1.2%.
             Although the dossier contains details of the physical and chemical characteristics of
        diacylglycerol oil, there is no description of the methods used to analyse the ingredients.
        The Committee assumes that validated standard techniques were used for this purpose.
        Interpretation and evaluation of the data submitted                                         69
</pre>

====================================================================== Einde pagina 69 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 70 ======================================================================

<pre>         On the basis of the compositional data provided, which pertains to five
    representative lots, the Committee concludes that there was little variation in the period
    of production from 1998 to 2000 (ADM02). The average linoleic acid and oleic acid
    content of the oil produced during this period was 60% and 28% respectively of the total
    amount of fatty acids. Data from more recent production runs, in February and March
    2002, also shows that the oil contains more linoleic acid (46%) than oleic acid (37%)
    (ADM02a). The saturated fatty acid fraction, which mainly consists of palmitic acid and
    stearic acid, is fairly consistent and amounts to approximately 4% of all fatty acids. This
    recent compositional data shows that the erucic acid content is 0.02% of the total fatty
    acid content (ADM02a). The Committee is of the opinion that this is sufficiently low for
    ENOVA oil to be used as an edible oil.
         The Committee concludes that the product information reliably indicates the actual
    composition of the ENOVA oil that is to be marketed, and that it is sufficient for the
    purposes of safety assessment.
3.2 II Effects of the production process applied to the NF
    Glycerol and fatty acids, the latter obtained from edible oil, are used for the production
    of the novel oil. All starting products are of food quality. The diacylglycerols are
    synthesised using a specific 1,3 lipase. This enzyme stereospecifically esterifies the fatty
    acids onto glycerol, such that the middle carbon atom (C2) remains unoccupied. In this
    process, no distinction is made between the first carbon atom and the third carbon atom.
    The applicant states that the European food industry has been using such an enzymatic
    esterification process since 1993. The crude product is purified by distillation,
    decolourisation and, finally, by deodorisation. After this, antioxidants are added.
         The applicant has demonstrated the absence of eight heavy metals, including lead,
    arsenic and mercury, in ENOVA oil. The detection limit used in this instance was 0.5 mg
    per kg.
         At the Committee’s request, the applicant has provided extensive information
    concerning the enzyme used (ADM02a). This information is briefly recapitulated below.
    The enzyme LipozymeIM is isolated from the fungus Aspergillus oryzae. This fungus
    has been genetically modified for this purpose by introduction of the gene that codes for
    the lipase enzyme from the fungus Rhizomucor miehei. In theory, the end product should
    not contain any lipase enzyme since, during the production of the diacylglycerols, the
    LipozymeIM is fixed to a carrier (it is immobilised). The food industry’s use of enzymes
    derived from Aspergillus oryzae dates back to before 1958. This microorganism is not
    known to have any pathogenic characteristics, and the US FDA considers it to be safe.
    LipozymeIM has been officially approved for use in the preparation of food by the
    Veterinary and Food Administration in Denmark and by the Canadian federal
70  Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 70 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 71 ======================================================================

<pre>department Health Canada. The applicant makes reference to various toxicological
studies carried out on the enzyme preparation by third parties, both in vitro and in rats.
On this basis, he concludes that the lipase in question can be safely used.
     The information contained in the dossier only provides the Committee with a broad
view of the various phases in the production process. However, the techniques employed
are the same as those used in the edible oil industry. The applicant provides no support
for his assertion that the stability of ENOVA oil is comparable to that of other edible
oils. The Committee assumes, however, that the novel product will comply with the
normal shelf-life and quality criteria for edible oils and fats. In order to safeguard the
food quality of the novel oil, the company is expected to adhere to Directive 93/43/EEC
on food hygiene (EC93). Supplementary information on the product’s fatty acid
composition, provided by the applicant (ADM02a), shows that well over 4% of the
ENOVA oil consists of trans fatty acids. The Committee states that this level of trans
fatty acids is not higher than that of all sorts of commercially available fats in our daily
diet. The Committee knows that it is virtually certain that this type of fatty acid
contributes to an increased the risk of cardiovascular diseases. It refers to the
recommendation of the Health Council of the Netherlands that the amount of trans fatty
acids in industrially processed edible vegetable oils and fats should be kept to a
minimum (HCN02). The Danish Veterinary and Food Administration recently insisted
that the amount of trans fatty acids should be reduced to no more than 1 g per 100 g of
oil.
     The Committee notes that in the Netherlands and the EU, no official permission is
required in connection with the use of enzymes as processing aids in the preparation of
foods. Some member states do assess the safety of such enzymes for consumers,
although the procedure involved is voluntary. In the Netherlands, processing aids of this
type are covered by the general provisions of the Commodities Act.
     The Committee confirms that the immobilised lipase, which is derived from a
genetically modified fungus of the species Aspergillus oryzae, can be safely used in this
production process. The Committee finds the supplementary information provided by
the applicant to be both adequate and reliable. The set of toxicological tests meet the
requirements of the European Commission's Scientific Committee on Food concerning
the testing of enzymes for food safety (SCF92). They also meet the more recent
guidelines proposed by Pariza and Johnson (Par01). The Committee notes that, two
years ago, the Australian food authority conducted an extensive evaluation of this very
lipase. Following this, it was authorised for use in the preparation of foods, under the
trade name of ‘palatase’ (FSA00). The toxicological data in the safety dossier used in
that Australian application are the same as those contained in the present dossier
(ADM02a, appendix F). Perhaps unnecessarily, the Committee notes that, as a result of
Interpretation and evaluation of the data submitted                                          71
</pre>

====================================================================== Einde pagina 71 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 72 ======================================================================

<pre>    the various heat treatments used during the production process, the end product will not
    contain any intact enzymes or other proteins.
         In summary, the Committee concludes that the applicant has sufficiently
    demonstrated that diacylglycerol oil contains no contaminants that are harmful to public
    health.
3.3 III History of the organism used as the source of the NF
    The fatty acids that are used as starting material for the novel oil are mainly derived
    from soybean oil (from the seeds of Glycine max) and rapeseed oil (from the seeds of
    Brassica campestris). Other normal vegetable oils are also used. The seed oils are
    derived from both traditional and genetically modified vegetable crops. According to the
    applicant, these varieties have been approved for human consumption by the
    governments of the United States, the EU and other countries.
         The Committee confirms that the traditional vegetable sources are safe for human
    consumption, and that these are used throughout the world in the oil and fat industry.
    The Committee has no objection to the use of oil derived from genetically modified
    crops, provided that these oils have been approved for human consumption via an
    authorisation procedure or notification procedure within the EU.
3.4 IX Anticipated intake and extent of use of the NF
    The applicant will place ENOVA oil on the market as customary cooking oil for home
    use. Its other application is as a replacement of oils used in various categories of foods.
    The applicant has calculated the quantities of the novel oil that will be ingested by
    consumers in the various end products. This calculation was performed on the basis of
    the following databases on food consumption. The applicant has listed, as far as
    possible, the figure of the average Dutch consumer in addition to that of the average
    European consumer.
    1 Eurostat Data Shop (1998-99 report) gives the average values for eight European
         countries, based on production and availability of foods.
    2 Reports drawn up by TNO Nutrition and Food Research on food consumption
         surveys of the population of the Netherlands in 1997-1998.
    3 Report drawn up by the Institute of European Food Studies (IEFS) regarding the
         methodological aspects of food consumption surveys (the data is from Belgium,
         Germany, Finland, Ireland and Italy).
    With regard to the use of ENOVA oil in spreadable fats, the applicant has worked on the
    basis of a daily consumption of 17 g ENOVA oil. This is based on an average intake of
72  Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 72 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 73 ======================================================================

<pre>27 g of spreadable fats per day (Eurostat) and on a liquid oil content of no more than
64% in products of this type. The daily consumption of ENOVA oil in the population of
the Netherlands would be a little lower, namely 14 g (TNO report: 22 g spreadable fats
per person per day).
     The amount of ENOVA oil in salad dressings can reach 80 to 90%. An intake of 14
g of dressing per person per day (Eurostat, including mayonnaise) would therefore
contribute 12 to 13 grams to the daily consumption of the novel oil. For the population
of the Netherlands, according to TNO’s data, this would amount to no more than 2 g.
     Bakery products normally contain about 1% of oil. If this is replaced by ENOVA oil,
then the daily consumption would be approximately 1 g, since Europeans eat 125 g of
bread and biscuits per day (IEFS). More detailed data is available on the population of
the Netherlands. They daily consume 173 g of bread, biscuits, croissants, pastries, cakes,
crackers and cookies (TNO report), so their daily intake of ENOVA oil would amount to
about 2 g.
     The average daily amounts of yoghurt consumed by Europeans (IEFS) and Dutch
people (TNO report) are 55 g and 78 g respectively. The novel oil can be incorporated
into yoghurt, at a concentration of about 3%. The intake of ENOVA oil would then
amount to about 2 g (1.7 g and 2.3 g respectively).
     The applicant states that health bars are consumed by nutritionally conscious
individuals. Bars of this type (which include cereal bars) contain high protein and/or
high energy and may be enriched with vitamin and mineral. However, no details are
available concerning the levels of consumption in Europe. The applicant assumes a daily
intake of 50 g (compared to 40-60 g in the United States). Considering a 6% fat
replacement, health bars would contribute about 3 g to daily ENOVA oil consumption.
     The applicant uses the term ‘health drinks’ to mean a) sport drinks b) drinks
containing added vitamins and minerals, c) liquid and reconstituted meal replacements,
and dry powder non-reconstituted products. There is no data on the consumption of
these products in Europe. The applicant assumes a daily intake of 250-325 g. Drinks for
maintaining your body weight generally have a fat content of 1 percent by weight. In
other words, one unit (can) of drink can contribute 3 g to the daily intake of ENOVA oil.
     The applicant works on the basis of a safe upper intake level of 2.35 g of ENOVA oil
per kg of body weight (equivalent to 165 g of oil per 70 kg individual per day). This is
based on the results of a two-year study in rats. The consumption data in each proposed
product category are compared to these results. The applicant observes that, for all
products, the intake of ENOVA oil as an ingredient is below this upper intake limit. The
applicant considers it unlikely that a given individual will consume products from all
categories of ENOVA-oil-containing foods on the same day. However, if this should
happen, then the total intake of ENOVA oil would amount to 51 g for the average
European and 38 g for the average Dutch person (0.7 g/kg and 0.5 g/kg respectively).
Interpretation and evaluation of the data submitted                                        73
</pre>

====================================================================== Einde pagina 73 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 74 ======================================================================

<pre>   Since both of these values also lie beneath the safe upper intake level used by the
   applicant, the latter concludes that unsafe intake levels are unlikely to be reached.
       The applicant also discusses another option, known as the holistic approach. In 16
   European countries, the average daily consumption of added vegetable oils amounts to
   about 12 g per individual with a body weight of about 70 kg. The Greeks have the
   highest intake level, at about 30 g per day. The applicant assumes that these are realistic
   estimates of oil intake, since this data is based on European oil production information
   from an independent food research institute in the United Kingdom (Leatherhead RA).
   This data automatically includes the oil used as ingredient in industrially processed
   foods.
       The Committee has noted the way in which the figure for the intended intake of
   ENOVA oil was derived. It points out that consumption data based on food production
   information tends to over-estimate the actual product intake. This is therefore only a
   rough indication. It is also the case that the consumption of certain products can differ
   highly from one European member state to another. In the case of health bars and health
   drinks, there is no information whatsoever regarding consumption. The Committee
   therefore concludes that there is limited support for the intake data. For the average
   Dutch consumer, the Committee itself estimated a total daily intake using the data
   provided by the applicant, which amounted to about 28 g per day. This was based
   on consumption of the most likely combination of different ENOVA-oil-containing
   products and ENOVA-cooking-oil (at an intake of 12 g/day). The Committee points out,
   however, that it remains unclear whether this total daily intake is representative of
   consumers in other EU member states.
       Data on the distribution of daily intake and on maximum intake in particular are
   essential for an assessment of possible adverse effects associated with exceeding the
   safe upper intake level. The applicant provides only average values of the consumption
   by European and Dutch people. The Committee believes that an average intake of all
   European citizens is not a useable figure in view of the dietary differences between the
   member states. In addition, the Committee has used the information on total fat intake in
   the population of the Netherlands to estimate the highest possible consumption (worst
   case scenario). Food consumption data produced by TNO (Hul98) shows that the 90th
   percentile of total fat intake in young men (aged 19 to 22) is 161 grams. This population
   group consumes the most energy. It is not realistic to suppose, however, that the total fat
   content of our diet could be replaced by diacylglycerols (according to the applicant this
   amounts to approximately 30% of total fat consumption from added sources).
74 Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 74 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 75 ======================================================================

<pre>3.5   X Information from previous human exposure to the NF or its source
3.5.1 Current exposure
      The applicant states that diacylglycerols and, to a much lesser extent,
      monoacylglycerols, are naturally present in animal and vegetable fats. This is especially
      true of seed oils such as cottonseed oil, soybean oil, sunflower oil and olive oil. About 1-
      10% of the fat in our daily diet normally consists of diacylglycerols. According to the
      Committee, this means that the average citizen ingests from 1-10 g of diacylglycerols in
      this way.
           Monoacylglycerols and diacylglycerols are internationally approved for use as food
      additives (emulsifying agents). Within the European Union, this has been set out in
      Directive No. 95/2/EC on food additives (EC95). The applicant cites data produced by
      third parties in 1989, which is claimed to show that the combined intake of these
      diacylglycerols and monoacylglycerols amounts to 3.6 g per day. A 1972 report stated
      that this value was between 1 and 10 g. In 1974, the Joint FAO/WHO Expert Committee
      on Food Additives (JECFA) assessed the safety of such ingredients. It concluded that it
      was not necessary to set an upper intake limit. As a result, the ADI (Acceptable Daily
      Intake) was defined as ‘unspecified’.
           The applicant makes reference to the situation in Japan, where the general
      consumption of diacylglycerol oil and foods containing diacylglycerols started about
      three years ago. To date, no product-related, adverse health effects have been reported.
           In summary, the applicant concludes that the ENOVA oil components have been in
      the food chain for many years, from both natural sources and as food additives.
           The Committee is of the opinion that the JECFA evaluation of the use of
      monoacylglycerols and diacylglycerols as food additives is only partially relevant to the
      application in question. The JECFA states that the amounts of these additives that are
      added to food should be no more than is technically necessary. Also, at that time, the
      JECFA’s investigation was mainly restricted to the monoacylglycerols. The Committee
      states that the use of the diacylglycerols in the ENOVA oil is different. This is because,
      as a fat macronutrient, these make up an important part of the daily diet.
           The Committee acknowledges the fact that diacylglycerols are naturally occurring
      chemical compounds. The human body also produces diacylglycerols, as metabolites of
      triacylglycerols, the main component of ordinary fat. The daily intake of the
      diacylglycerol oil proposed by the applicant is of the same order of magnitude as the
      joint intake via natural fats and added emulsifying agents. Based on the fact that such
      diacylglycerols are already present in our diet, the Committee takes the view that
      consumption of the novel product in the use proposed by the applicant will be unlikely
      Interpretation and evaluation of the data submitted                                          75
</pre>

====================================================================== Einde pagina 75 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 76 ======================================================================

<pre>      to result in adverse effects. The nutritional equivalence with traditional triacylglycerol
      oils also supports this conclusion (see section 3.6). In addition, the Committee is not
      aware of any report from the scientific literature in the field of biomedicine, in which
      consumption of diacylglycerols has been associated with health complaints.
3.5.2 Research involving human subjects
      In the dossier, the applicant discusses in detail the results of thirteen studies on
      diacylglycerol oil, all of which involved human subjects. Details are included under
      theme XI ‘nutritional value’ and under theme XIII ‘toxicological information’. The
      Committee has disregarded several of these studies because they did not use control
      groups nor did they give accurate data on the level of exposure. It assessed nine studies
      which were of the most relevance to this safety assessment. Two of these studies, both
      confidential company reports, have not been published. They have been included in the
      dossier as appendices. The applicant includes two tables containing information about
      who published the study, the number of subjects involved, the amount of oil
      administered, the calculated exposure and the period of intake. The Committee states
      that only two of the nine studies were set up for the purposes of safety assessment,
      evaluating the results of daily consumption over a period of three months. Four of the
      studies were set up to study physiological and nutritional aspects, while three others
      assessed the presumed effects on fat metabolism.
           The applicant first summarises the results of three single-dose studies that were all
      carried out using double-blind, crossover design. Healthy male volunteers (10-17 per
      group) ingested a single-dose of diacylglycerol oil. The control group received
      triacylglycerol oil with almost the same fatty acid composition. The tested dose per
      group was 10, 20 or 44 g of oil, emulsified in a calorie-rich drink. Fasting blood samples
      were taken prior to the oil administration, and blood samples were again taken four and
      six hours after oil consumption. The serum parameters investigated include standard
      haematological variables (numbers of white and red blood cells, and blood platelets, Hb,
      erythrocyte sedimentation rate) and enzyme activities that are indicative of liver damage
      (the GOT, GPT and gamma-GPT transferases). In addition, an extensive set of clinical-
      chemical variables was assessed, which specifically targeted fat metabolism. This set
      included the various types of lipid (including triglycerides*, total cholesterol, esterified
      and free cholesterol, free fatty acids, phospholipids, β-lipoprotein, lipid peroxide) but
      also glucose and insulin amongst others. The concentration of fatty acids,
      triacylglycerols and cholesterol in various serum lipoprotein fractions (namely
      chylomicrons, LDL, VLDL and HDL particles) was measured.
*     This standard clinical-chemical term is synonymous with triacylglycerols
76    Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 76 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 77 ======================================================================

<pre>       The applicant then goes on to review the results of six longer-term studies in which
  the oil was administered daily. These repeated dose studies all used a randomised,
  double-blind design (one was of the crossover type and five were parallel) and had 8 to
  43 volunteers per group. Apart from the two safety studies, the aim of these repeated
  dose studies was to investigate physiological and nutritional aspects or changes in body
  fat. Two of the latter type of studies involved individuals who were overweight or obese.
  Throughout the entire period of the studies, which varied from one to six months,
  diacylglycerol oil was consumed in daily amounts which, in the various study groups,
  varied from 10 to 44 g per individual. The control groups received triacylglycerol oil
  whose fatty acid composition was identical, or almost identical, to the diacylglycerol oil
  to be tested. One study differed in this respect, although the control oil in question did
  have a comparable caloric value. The oils were rendered suitable for consumption,
  mainly by incorporating them into foods such as bread, mayonnaise, soup, breakfast
  products and ready-made lunches, or by emulsifying them in drinks. Blood was taken at
  regular intervals, after an overnight fast*. The Committee observed that only in the case
  of the two safety studies large numbers of serum parameters were assessed. These
  included extensive haematology (including blood coagulation parameters) and various
  enzyme activities, in order to assess whether the liver function was normal. An
  extensive set of clinical-chemical tests were carried out, namely the standard tests for
  biochemical variables (including protein, albumin, urea nitrogen, LDH) and minerals, as
  well as the parameters of fat metabolism (the same set as in the single-dose studies).
  Conversely, the studies aiming at other endpoints than safety only examined a limited
  set of fat metabolism parameters, in addition to an extensive assessment of various body
  size measurements in order to study changes in body fat deposition.
       According to the applicant, the various studies did not reveal any clinically relevant
  findings. At dosages of 0.5-0.7 g oil per kg of bodyweight over a period of 12 or 24
  weeks, the type and number of complaints after consumption of the test oil were not
  different compared to those after consumption of the control triacylglycerol oil
  (gastrointestinal complaints as well as upper respiratory infections and headaches were
  listed). In summary, the applicant states that no health complaints or other adverse
  effects have been reported in relation to the test product.
       Three studies involving repeated exposure also measured the blood levels of ketones
  (breakdown products of fatty acids). This showed that the concentration of ketones in
  the blood following the long-term intake of diacylglycerols did not differ significantly
  from that found when triacylglycerols were used.
* So-called ‘fasting blood’ was analysed in all of the repeated dose studies. This means that no specific postprandial effects
  could be demonstrated, i.e. effects that occur several hours after ingestion.
  Interpretation and evaluation of the data submitted                                                                      77
</pre>

====================================================================== Einde pagina 77 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 78 ======================================================================

<pre>         The applicant states that the studies on human subjects have clearly demonstrated
    that diacylglycerol oil is safe, even when large amounts are consumed on a daily basis.
    The Committee has sufficient data to assess the safety of exposure in humans. It has
    extensively examined nine studies referred to by the applicant, and has concluded that
    these are of adequate scientific quality. The Committee has determined that, in the case
    of healthy volunteers with a normal body weight, no clinically relevant or significant
    differences were found between long-term consumers of test oil containing
    diacylglycerols and those consuming traditional triacylglycerol oil. On the basis of
    available studies on human subjects, the Committee agrees with the applicant that a
    daily intake of about 40 g of diacylglycerol oil has no adverse effects on health.
3.6 XI Nutritional information on the NF
    The applicant intends to place ENOVA oil on the market as an alternative to customary
    edible oil. Food manufacturers can also incorporate the oil into various types of foods,
    as explained in section 3.4.
         The applicant first gives a short, general summary of fat metabolism, based on
    information derived from scientific publications. He follows this with an extensive
    discussion of digestion, absorption and diacylglycerol metabolism. The emphasis here is
    on the type of chemical compound involved, and not on the individual fatty acids, since
    these are the same as those in commonly used vegetable oils and fats. ENOVA is a
    diacylglycerol oil consisting mainly of a mixture of 1,3-diacylglycerols and 1,2-
    diacylglycerols in a ratio of 7:3 (see section 3.1). These compounds are partially or
    completely broken down by lipases in the gastrointestinal tract, in the same way as
    triacylglycerols. The applicant refers to research in rats which shows that the main
    conversion products are 1 (or 3)-monoacylglycerols. These are then converted into
    glycerol and fatty acids, which are absorbed as such by the intestine.
         The most important difference with the digestion of triacylglycerols* is that,
    following the intake of diacylglycerols, the formation of 2-monoacylglycerols is limited.
    As a result, relatively more fatty acids are broken down to release energy. According to
    the applicant, this means that they are not available for re-synthesis in triacylglycerols,
    and hence do not contribute to fat depostion. Studies on rats and humans have shown
    that, in the first couple of hours after consuming diacylglycerol oil, this produces a
    smaller increase in the concentration of triglycerides in the blood (a postprandial effect)
    compared to the consumption of traditional, triacylglycerol-containing oils.
*   In the cells which line the intestine, 2-monoacylglycerols and fatty acids absorbed from the intestinal lumen are normally
    used to re-synthesise triacylglycerols. The latter are referred to as endogenous triacylglycerols. These are then packaged
    in chylomicrons (lipoprotein particles), after which they pass through the lymph system and enter the blood as a fine
    emulsion.
78  Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 78 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 79 ======================================================================

<pre>     The applicant makes reference to a recent, well conducted study in rats. This
showed that the energy value and biological availability of diacylglycerol oil is identical
to that of triacylglycerol oil, provided that this has a comparable fatty acid composition.
In summary, the applicant concludes that it is not likely that the intake of ENOVA oil in
the proposed application could have any negative nutritional impact. The provision of
essential fatty acids is safeguarded, since the oil contains both linoleic acid and alpha-
linolenic acid. Furthermore, there is no adverse effect on the availability of important
nutrients and energy, since this novel oil’s energy value and digestibility are the same as
those of traditional triacylglycerol oils.
     The Committee concurs with the applicant’s conclusion that, in nutritional terms,
diacylglycerol oils are equivalent to triacylglycerol oils. The information contained in
the dossier on the digestion and metabolims of diacylglycerols is adequately supported
by scientific data from recent studies. While most of these studies were performed on
rats, some of the others did in fact use human subjects.
     The applicant discusses the possibility that the elevated free fatty acid
concentrations which follow the consumption of diacylglycerol oil could lead to
incomplete digestion, resulting in the production of excess ketone bodies. From the
point of view of nutritional physiology, the Committee considers it unlikely that this
would occur. It is supported in this view by the results of various studies on human
subjects which have been included in the dossier (see section 3.5). Nor indeed did the
105-week toxicological study in rats reveal anything unusual in this regard.
     The applicant supplied data on the possible repercussions of diacylglycerol
consumption for fat-soluble vitamins. This was limited to a single study of 15 male
volunteers using a double-blind, parallel design. For twelve weeks, these individuals
received a daily amount of 20 g of diacylglycerol oil, incorporated into mayonnaise or a
drink. After intervals of four, eight and twelve weeks, the serum concentrations of
vitamin A, vitamin E (tocopherols) and vitamin D derivatives were not significantly
different from those of a control group given triacylglycerol oil. The researchers
concluded that the absorption of fat-soluble vitamins had not been adversely affected.
The Committee is of the opinion that the reported study of fat-soluble vitamins was a
very small-scale investigation. Furthermore, only a limited set of variables was assessed.
No mention was made of carotenoids (pro-vitamins A), for example. However, this
issue is not a cause for concern. Given that, in nutritional terms, diacylglycerols are
equivalent to triacylglycerols, the Committee does not expect the ingestion of
diacylglycerols to change the uptake of fat-soluble vitamins.
Interpretation and evaluation of the data submitted                                         79
</pre>

====================================================================== Einde pagina 79 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 80 ======================================================================

<pre>3.7 XII Microbiological information on the NF
    With regard to microbiological risks, the applicant states that ENOVA oil gives no cause
    for concern, due to the nature of production process used. Ongoing microbiological
    testing of different production batches always yields values within safe food limits.
         The Committee is of the opinion that any further specification of this section would
    be irrelevant. In view of the high temperatures used during the production process and
    the limited moisture content of ENOVA oil, this product is unlikely to contain any
    microorganisms.
3.8 XIII Toxicological information on the NF
    Diacylglycerol oil has been investigated for mutagenicity, using an in vitro test. In
    addition, various toxicity tests have been carried out in rats. The applicant has
    summarised all of these results in the safety dossier. He also points to the assessment
    report drawn up by a group of American experts, who assessed these toxicity tests in
    connection with the GRAS application (see section 2.6).
         The mutagenic potential of the novel oil has been tested in standard bacterial
    mutation tests, using a maximum of 5 mg of diacylglycerols per test plate. On the basis
    of all negative responses, the applicant concludes that the product is devoid of
    mutagenic activity.
         The acute oral toxicity of both diacylglycerols and diacylglycerol oil has been tested
    in rats. Using oral intubation, ten animals were given a single dose of 15 g of test
    compound per kg of body weight (the control animals received 15 g of rapeseed oil).
    After 14 days, the rats were sacrificed and autopsied. No adverse effects were observed.
         In the subacute study, for a period of 28 days rats were given feed with a total fat
    content of 10% of which 0.2%. 1.0% and 5.0% consisted of diacylglycerols. This
    resulted in exposures of 0.14, 0.72 and 3.5 g/kg/day respectively. The toxicological
    effects were assessed against standard criteria, namely clinical signs, body weight, feed
    intake, opthalmoscopic examination, clinical-chemical (including urine) and
    haematological analyses, organ weights, gross pathological examination and
    microscopic examination of appropriate tissues. The results did not reveal any evidence
    of toxic effects. According to the American assessment report, in the treated rats a few
    variables were significantly different (such as lower kidney and liver weights) from
    those in control rats. The latter had been fed on standard rat feed whose fat level had
    been adjusted to 10% using maize oil. The authors concluded that these effects were not
    treatment-related, since the values in question did not differ from those found in another
    group of control animals. These animals were fed with fat-free rat feed to which, instead
80  Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 80 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 81 ======================================================================

<pre>of the test substance, 5% rapeseed oil (in addition to 5% maize oil) had been added. In
summary, the applicant concludes that no toxic effects were observed in rats who had
received 5% or less of the test compound in their feed.
     Finally, nutritional repercussions and possible toxicity were investigated in rats
during chronic exposure over a period of two years. Per group, 60 male and 60 female
rats were given feed with a total fat content of 7%, of which 2.65% or 5.3% consisted of
diacylglycerol oil. This resulted in exposures of 1.18 and 2.35 g/kg/day respectively in
the females, and 0.89 and 1.77 g/kg/day respectively in the males. One control group
was given feed with 5.3% vegetable oils whose fatty acid composition was comparable
to that of diacylglycerol oil. A second control group received feed mixed with rapeseed
oil and soybean oil, which had a total fat content of 5.3%. Ten animals from each group
were sacrificed after 30 and 77 weeks. These individuals were subjected to a detailed
assessment using identical criteria to those employed in a 90-day toxicological study in
rats, including an analysis of the urine. The same procedure was applied to any animals
which died early.
     The applicant reports that all groups had a comparable pattern of early deaths. After
105 weeks, the number of survivors ranged from 10 to 16 in the treated groups and from
10 to 18 in the control groups. These animals were autopsied, but they were not assessed
in detail. The researchers justified this on the grounds that autopsies carried out during
the study period revealed no differences between the treated rats and the control animals
that could be ascribed to consumption of the novel oil. The applicant discusses the
results of this study in detail and concludes that a chronic exposure of 2.35 g/kg/day
does not produce toxicologically significant or treatment-related effects.
     The Committee concludes that the toxicity tests put forward by the applicant were
carried out well and that the results were presented in an orderly and proper manner. It is
of the opinion that the tested preparations of pure diacylglycerols and of diacylglycerol
oils are both sufficiently representative of commercially produced ENOVA oil. At the
Committee’s request, the applicant has provided a detailed product specification of the
oil that was tested in the chronic toxicological study (ADM02a). This well documented
data shows that the composition of the various lots of test compound corresponds well
with that of the commercial product.
     The Committee believes that the applicant has correctly assessed the results of the
toxicological studies. The Committee points out that some aspects of the 105-week
study in rats were not carried out in accordance with the OECD guideline for chronic
toxicological studies (Test Guideline 452). However, the information supplied is
sufficient for a safety evaluation of the novel product. This is because full toxicological
assessments, including histopathology, were carried out after 30 and 77 weeks of
exposure to diacylglycerol oil. Accordingly, a separate 90-day study in rats is
unnecessary. During the chronic toxicological study, anomalous values for some
Interpretation and evaluation of the data submitted                                         81
</pre>

====================================================================== Einde pagina 81 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 82 ======================================================================

<pre>   variables were occasionally found in the groups of treated animals. This involved some
   haematological variables (such as prothrombin time, number of blood platelets),
   clinical-chemical variables (such as lactate dehydrogenase, HDL cholesterol, and
   several aminotransferases) and organ weights. The Committee agrees with the
   conclusion of the applicant that these differences were not caused by the test compound
   since they were not consistently observed: the differences were demonstrated at a single
   point in time, for example and/or they showed no dose-dependent effect. Furthermore,
   none of these anomalies were associated with histopathological changes.
         To the best of the Committee’s knowledge, there is no data to suggest that the novel
   oil has allergenic potential or has any effects on reproduction and development. It can
   confirm that the novel diacylglycerol oil is not mutagenic. No adverse effects have been
   found in rats which were exposed to the novel product on a daily basis for a period of 18
   months. In view of the difference in exposure between male and female rats, the
   Committee has fixed the highest tested dose at on average 2 g of diacylglycerol oil per
   kg of body weight per day. It regards this as the NOAEL (no observed adverse effect
   level), since no treatment-related effects were observed at this level of exposure. On the
   basis of long-term exposure studies in rats, the Committee concurs with the applicant
   that this dose represents the safe upper intake level. However, it objects to the use of the
   term ‘ADI’* or ‘Acceptable Daily Intake’. This term is reserved for food additives,
   pesticides and contaminants, but not for foods or food ingredients, since no complete
   dossiers are being submitted for the latter category. At the Committee's request, the
   applicant has modified the text of the dossier summary (see annex D).
         A number of studies on human subjects which are relevant to the assessment of
   ENOVA oil have been evaluated in section 3.5. On the basis of all the available
   toxicological data, the Committee does not anticipate that individuals consuming the oil
   in the quantities proposed by the applicant will experience any adverse health effects.
*  The ADI (Acceptable Daily Intake) is defined by the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives (JECFA) as
   ‘the amount of a food additive, expressed on a body weight basis that can be ingested over a lifetime without appreciable
   risk’. To determine an overall NOAEL (No Observed Adverse Effect Level), a very extensive dossier is required
   containing the results of studies into reproduction, teratogenicity, chronic toxicity and carcinogenicity. By using safety
   factors, an ADI can be derived from this value. The ADI in turn can be used to derive product reference values by means
   of policy.
82 Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 82 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 83 ======================================================================

<pre>       Literature
ADM02  Archer Daniels Midland Company. Dossier: ENOVATM oil (diacylglycerol oil) as a novel food ingredient in
       the European Union. Decatur (USA), ADM 2002.
ADM02a Archer Daniels Midland Company. Letter dated August 30, 2002, with additional information to answer
       questions of the Committee Safety Assessment of Novel Foods. Decatur (USA), ADM 2002.
EC93   Council Directive 93/43/EEC of 14 June 1993 on the hygiene of foodstuffs. Official Journal 1993; L 175: 1–
       11).
EC95   European Parliament and Council Directive No 95/2/EC of 20 February 1995 on food additives other than
       colours and sweeteners. Official Journal 1995; L 061: 1 – 40.
EC97   Regulation (EC) 258/97 of the European Parliament and of the Council of 27 January 1997 concerning
       novel foods and novel food ingredients. Official Journal 1997; L43: 1-6.
EC97a  97/618/EC: Commission Recommendation of 29 July 1997 concerning the scientific aspects and the
       presentation of information necessary to support applications for the placing on the market of novel foods
       and novel food ingredients and the preparation of initial assessment reports under Regulation (EC) No 258/
       97 of the European Parliament of the Council. Official Journal 1997; L 253: 1-36.
EC00   Directive 200/13/EC of the European Parliament and of the Council of 20 March 2000 on the approximation
       of the laws of the Member States relating to the labelling, presentation and advertising of foodstuffs Official
       Journal 2000; L 109: 29-42.
FAO96  Biotechnology and Food Safety. Report of a joint FAO/WHO Consultation. Rome, FAO 1996.
FAO01  Evaluation of allergenicity of genetically modified foods. Report of a joint FAO/WHO expert consultation
       on allergenicity of foods derived from biotechnology. Rome, FAO 2001.
       Literature                                                                                                      83
</pre>

====================================================================== Einde pagina 83 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 84 ======================================================================

<pre>FSA00  Assessment report by the Food Standards Australia New Zealand (FSANZ): Lipase from genetically
       modified aspergillus oryzae, Application A402. http://www.foodstandards.gov.au/standardsdevelopment/
       applications/index.cfm
HCN92  Commissie Toxicologische aspecten van biotechnologisch bereide producten. Productveiligheid bij nieuwe
       biotechnologie. The Hague, Health Council of the Netherlands 1992, publication number 1992/03.
HCN02  Health Council of the Netherlands: Committee on Trends in food consumption. Significant trends in food
       consumption in the Netherlands. The Hague: Health Council of the Netherlands, 2002; publication no.
       2002/12.
Hul98  Hulshof KFAM, Kistemaker C, Bouman M. De inname van energie en voedingstoffen door Nederlandse
       bevolkingsgroepen – Voedselconsumptiepeilingen 1997–1998. TNO-rapport V98.805, Zeist, 1998.
OECD93 Safety evaluation of foods derived by modern biotechnology. Concepts and principles. Paris, OECD 1993.
OECD96 OECD Workshop on Food Safety Evaluation. Paris, OECD 1996.
OECD98 Report of the OECD workshop on the toxicological and nutritional testing of novel foods. Paris, OECD
       1998.
OECD00 Report of the task force for the safety of novel foods and feeds. Paris, OECD 2000.
Par01  Pariza MW, Johnson EA. Evaluating the safety of microbial enzyme preparations used in food processing:
       update for a new century. Regulatory Toxicol Pharmacol 2001; 33: 173-186.
SCF92  Guidelines for the presentation of data on food enzymes (Opinion expressed on 11 April 1991). Brussels,
       Scientific Committee on Food of the EU 1992.
SCF99  Opinion concerning the scientific basis for determining whether food products, derived from genetically
       modified maize, could be included in a list of food products which do not require labelling because they do
       not contain (detectable) traces of DNA or protein. Brussels, Scientific Committee on Food of the EU 1999.
SSC99  Opinion of the Scientific Steering Committee on microbial resistance, Brussels, Scientific Steering
       Committee of the EU 1999.
WHO91  Strategies for assessing the safety of foods produced by biotechnology. Report of a joint FAO/WHO
       Consultation. Geneva, WHO 1991.
WHO00  Safety aspects of genetically modified foods of plant origin. Report of a joint FAO/WHO expert
       consultation on foods derived from biotechnology. Geneva, WHO 2000.
84     Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 84 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 85 ======================================================================

<pre>A Request for advice
B The committee
C EU-procedure
D Executive summary of the dossier
  Annexes
                                   85
</pre>

====================================================================== Einde pagina 85 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 86 ======================================================================

<pre>86 Diacylglycerol oil</pre>

====================================================================== Einde pagina 86 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 87 ======================================================================

<pre>Annex A
      Request for advice
      On 18 August 1999, the Minister of Health, Welfare and Sport wrote as follows to the
      President of the Health Council of the Netherlands (under reference GZB/VVB
      993428):
      Since May 1997, Regulation (EC) 258/97 concerning novel foods and novel food ingredients has been in
      force in the European Union. Under the Regulation, the safety of novel foods has to be assessed as part of a
      community procedure.
           Following discussions regarding the possibility of the Health Council making such assessments, the
      State Secretary for Agriculture, Nature Management and Fisheries and I wish the Council to take
      responsibility for safety assessment for a period of several years during the fist phase of implementation of
      European Regulation (EC) 258/97. It is considered appropriate that the Health Council should initially take
      on this role because the assessment activities will be of an experimental nature, involving both a new form
      of assessment (i.e. pre-marketing assessment) and, in many cases, new categories of foodstuff (primarily
      foodstuffs with a genetically modified basis and functional foods or nutraceuticals). We also feel that if
      assessments are made by a body with the Council's independent scientific status, this will support the
      validity of the Netherlands' opinion in the eyes of the European Committee and other member states.
           My wish is to make the procedure and the assessment as open and transparent as possible, so as to
      enhance consumer trust in the safety of novel foods. I would like the Health Council to support this
      Request for advice                                                                                            87
</pre>

====================================================================== Einde pagina 87 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 88 ======================================================================

<pre>   objective by, for example, allowing perusal of the application dossier (insofar as consistent with the need to
   protect the confidentiality of commercially sensitive information) and publishing the criteria upon which
   safety assessments are made.
   The Minister of Health, Welfare and Sport,
   (signed) dr E Borst-Eilers
88 Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 88 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 89 ======================================================================

<pre>Annex B
      The Committee
      •  Prof. dr LM Schoonhoven, chairman
         emeritus professor of entomology; Wageningen University and Research centre
      •  Prof. dr CAFM Bruijnzeel-Koomen
         professor of dermatology/allergology; Academic Hospital Utrecht
      •  Ir EJ Kok
         toxicologist; National Institute for Quality Control of Agricultural Products,
         Wageningen
      •  Dr CF van Kreijl
         molecular biologist; National Institute of Public Health and the Environment,
         Bilthoven
      •  Prof. dr P van der Laan
         professor of statistics; Technical University Eindhoven
      •  Dr B Loos, advisor
         Committee on Genetic Modification, The Hague
      •  Prof. dr FM Nagengast
         gastro enterologist; Academic Hospital Nijmegen
      •  Dr ir JMA van Raaij
         food physiologist; Wageningen University and Research centre
      •  Prof. dr ir G Schaafsma
         professor of nutrition; TNO Nutrition and Food Research, Zeist
      •  Prof. dr EG Schouten
         professor of epidemiology; Wageningen University and Research centre
      The Committee                                                                     89
</pre>

====================================================================== Einde pagina 89 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 90 ======================================================================

<pre>   •  Dr GJA Speijers
      toxicologist; National Institute of Public Health and the Environment, Bilthoven
   •  Prof. Dr WJ Stiekema
      professor of bioinformatics; Wageningen University and Research centre
   •  Ir R Top, advisor
      Ministry of Health, Welfare and Sport; The Hague
   •  Prof. dr WM de Vos
      professor of microbiology; Wageningen University and Research centre
   •  Dr RA Woutersen
      toxicologist; TNO Nutrition and Food Research, Zeist
   •  Dr ir M Rutgers, scientific staff member
      Health Council of the Netherlands, The Hague
   Administrative assistance: CL Vuijst; Health Council of the Netherlands, The Hague
   Lay-out: J van Kan; Health Council of the Netherlands, The Hague
90 Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 90 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 91 ======================================================================

<pre>Annex C
      EU-procedure
      When manufacturers bring novel foodstuffs onto the market, consumer safety has to be
      ensured. In 1997, a European Regulation (EC97) came into force, laying down the
      procedure for approving the market introduction of novel foodstuffs. The procedure
      recognizes various actors. The applicant must decide whether a product is a novel
      foodstuff, i.e. a substance that has not previously been available for human consumption
      to any substantial extent within the European Union and is not substantially equivalent
      to any existing product. (If a foodstuff is substantially equivalent to any existing
      product, it is sufficient to inform the authorities of its market introduction). Food
      additives, aromas and extracts are excluded from the provisions of the directive, since
      they fall within the scope of an established assessment regime. Before marketing a novel
      foodstuff, the applicant must compile a safety dossier that complies with the
      Recommendations of the European Commission (EC97a). These Recommendations are
      based on reports by a number of bodies that have studied the issue of novel foodstuffs, in
      particular the OECD (OECD93, OECD96) and the WHO/FAO (FAO96, WHO91). The
      Health Council of the Netherlands has also considered the question earlier (HCN92).
      Since publication of the EU recommendations, international efforts have been made to
      clarify and adapt the latest scientific knowledge in the field (FAO01, OECD98,
      OECD00, SCF99, SSC99, WHO00).
           Having compiled a dossier in line with the guidelines, the manufacturer has to
      submit it to the competent authority in the country where the product is to be marketed
      first. This dossier is assessed by the national safety assessment authority. In the
      Netherlands, this is the Minister of Health, Welfare and Sport, who is advised by the
      EU-procedure                                                                               91
</pre>

====================================================================== Einde pagina 91 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 92 ======================================================================

<pre>   Health Council. The President of the Health Council has created a Committee on the
   Safety Assessment of Novel Foods (VNV Committee) to advise the minister on behalf
   of the Council.
        On the basis of the scientific state of the art, the committee has to decide whether the
   information provided by the manufacturer is accurate and complete and whether the
   manufacturer's conclusions are sound. The committee then draws up a report on its
   findings for the minister; this report must also comply with the European
   Recommendation (EC97a, part III). After considering the report, the minister formulates
   the Netherlands' opinion regarding the foodstuff in question, which is discussed at
   European level in the Standing Committee on the Food Chain and Animal Health. All
   other European member states are invited to express a 'second opinion' regarding the
   dossier and the first opinion. The Standing Committee then arrives at a final judgement.
   If a dossier is particularly contentious, the European Commission calls upon the
   Scientific Committee on Food for advice. If consensus still cannot be reached, the issue
   is referred to the European Council of Ministers.
92 Diacylglycerol oil
</pre>

====================================================================== Einde pagina 92 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 93 ======================================================================

<pre>Annex D
      Executive summary of the dossier
      Executive summary of the dossier 93
</pre>

====================================================================== Einde pagina 93 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 94 ======================================================================

<pre>94 Diacylglycerol oil</pre>

====================================================================== Einde pagina 94 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 95 ======================================================================

<pre>New Revised Summary of
the ENOVA™ Oil Petition

ENOVA™ OIL (DIACYLGLYCEROL OIL) |
AS A NOVEL FOOD INGREDIENT
IN THE EUROPEAN UNION

A Novel Food Application presented to
The European Union (The Netherlands)
by:
</pre>

====================================================================== Einde pagina 95 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 96 ======================================================================

<pre>SUMMARY

In accordance with the European Union Novel Food Regulations (EC-258/97), Archer Daniels
Midland Company (Decatur, Illinois) is applying for the approval to place ENOVATM oil, a healthier
dietary oil, on the European Union market as a novel food ingredient. ENOVATM oil, also referred to
as Diacylglycerol Oil (DAG-oil), is a mixture of approximately 80% diacylglycerol (DAG), 20%
triacylglycerol (TAG) and less than 5% monocylglycerol (MAG). The terms ENOVATM oil and

DAG-oil will be used interchangeably throughout this document.

The intended use of ENOVA™ oil (DAG-oil) is for home use as cooking oil and as an ingredient for
fat spreads/margarine, dressing for salads/mayonnaise, bakery products (bread, biscuits, croissants,

pastries, cakes, crackers and cookies), yogurt, health bars and health drinks (meal replacers).

The main component of ENOVA™ oil is DAG. The DAG molecules are produced as predominantly
1,3 - DAG (approximately 70%), with smaller amounts (approximately 30%) as 1,2 - DAG. The
individual fatty acid side chains are esterified randomly into these positions. Oleic acid (C18:1),
linoleic acid (C18:2) and linolenic acid (C18:3) are the main fatty acid components of DAG and are

derived primarily from soybean (Glycine max) and rapeseed (Brassica campestris) oils.

DAG is produced by esterification of the already mentioned fatty acids with either monoacylglycerol

or glycerol in the presence of an immobilized lipase enzyme (Lipozyme IM®, Novo Nordisk).
</pre>

====================================================================== Einde pagina 96 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 97 ======================================================================

<pre>From the nutritional point of view, ENOVA™ oil (DAG-oil) will be used as a replacement for the
customary cooking oil and as an ingredient of the already indicated food categories. The
introduction of ENOVA™ oil (DAG-oil) into the European diet will not impair or limit the
availability of essential nutrients, important natural dietary components or energy. This is due to the
following reasons: a) DAG-oil has about the same energy value and digestibility as TAG or
customary oil (9 Keal/g): b) The main fatty acid components in DAG-oil are the essential fatty acids
Linoleic (15-65%) and Linolenic (about 15%). Thus, DAG-oil will not limit the dietary provisions of
these important nutrients; and c) The consumption of DAG-oil does not interfere with the

bioavailability of vitamins or impair their intestinal absorption or normal metabolism.

The safety of ENOVA™ (DAG-oil) has been based on the following:

a) Thereis a history of previous human exposure to partial glycerides (MAG and DAG) from
both, natural sources (primarily seed oils) and as additives (emulsifiers) used in the food
industry. |

b) DAG-oil and related DAG products have been consumed by the general population in
Japan for over 3 years. No serious adverse effects have been reported.

c) There are several toxicological studies in experimental animals, that include acute, sub-
acute and chronic exposure investigations that demonstrate the safety of DAG-oil, even at
levels as high as 2.35 g/kgBW (equivalent to 165 g for a 70 kg reference person).

d) Experimentally, it has been shown that DAG-oil is not mutagenic.

e) There are 15 different completed human clinical trials that have been conducted using DAG
or DAG-oil at various levels as high as 45 g/day (0.64 2/kgBW) for periods up to one year
and no clinically important adverse effects have been observed. These studies include

investigations on nörmal adults and children, diabetic individuals and subjects undergoing
</pre>

====================================================================== Einde pagina 97 =================================================================

<br><br>====================================================================== Pagina 98 ======================================================================

<pre>hemodialysis.

f) A panel of scientific experts in the United States has recently evaluated the existing scientific
data on the use of DAG and DAG-oil, concluding that these compounds are safe.
Furthermore, that DAG-oil has been accepted for safe use by the U.S. FDA as cooking oil and
as an ingredient in margarine/fat spreads. This evaluation has been the basis for gaining
GRAS status. Further expansion of the original categories is now being pursued with the
U. S. FDA. |

g) Previous safety evaluations of partial glycerides (DAG and MAG) by the Joint Executive
Committee on Food Additives (JECFA) and the Federation of American Society for

Experimental Biology (FASEB) have also determined that diglycerides are safe for human

use.
h) It has been estimated that in the Netherlands the potential average DAG-oil consumption
would be about 38 g/person/day (0.54 g/kg/BW), and in the EU such consumption would be
| 51 g/person/day (0.73 g/kgBW). Due to the method of calculation, these consumption figures

overestimate what may occur in practice.

Animal safety studies show that ENOVA™ oil can be consumed on a long term basis at a
tolerable upper intake level of 2.35 g/kg-BW/day, which for a 70 kg BW reference person is
eguivalent to 165 g/day. Therefore, all this information leads to the conclusion that ENOVA™
oil (DAG-oil) can be safely consumed in Europe as cooking oil and as an ingredient in the
proposed food categories under conditions of normal food use. Thus, ENOVATM oil (DAG-oil)

meets the requirements to be cleared as Novel food ingredient in the E.U.
</pre>

====================================================================== Einde pagina 98 =================================================================

<br><br>